Pag-unlad makabagong gamot sa mundo ng mga diagnostic ay hindi tumitigil na humanga sa mga nagawa nito, at ngayon ang doktor ay hindi kailangang gumawa ng mga pagpapalagay tungkol sa posibleng diagnosis, umaasa lamang sa hindi direktang mga palatandaan. Ang paglikha at pagpapakilala sa mundo ng pananaliksik sa laboratoryo ng isang enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ay nagpapahintulot sa isa na mabilis at tumpak na matukoy hindi lamang ang pagkakaroon ng isang pathogen, kundi pati na rin ang maraming iba pang mga katangian ng sakit.

Kasaysayan ng paglikha at pag-unlad ng ELISA

Ang pamamaraang ito ng pagsusuri ng dugo ay nagsimulang gamitin sa praktikal na gamot pabalik sa kalagitnaan ng huling siglo - sa isang lugar noong 60s. Ang orihinal na layunin nito ay Siyentipikong pananaliksik sa larangan ng histology, na limitado sa paghahanap at pag-aaral ng cellular antigenic na istraktura biological species. Ang pagsusuri sa dugo ng ELISA ay batay sa pakikipag-ugnayan ng mga kaugnay na antigens (AGs) at mga partikular na antibodies (ABs), na may pagbuo ng isang "antigen-antibody" complex na tinutukoy ng isang enzyme.

Ang hindi pangkaraniwang bagay na ito ay nag-udyok sa mga siyentipiko na magpasya na ang pamamaraan ay maaaring gamitin upang makilala ang mga compound ng protina iba't ibang klase, nabuo sa serum ng dugo kapag ang isang pathogen ay pumasok sa katawan. Dahil sa direktang paglahok nito sa paggana immune system Ang mga compound na ito ay tinatawag na immunoglobulins (IG, Ig), at ang pagtuklas ay naging pinakamalaking tagumpay sa mga diagnostic ng laboratoryo.

Kasabay nito, ang napakasensitibong pamamaraang ito ay nagsimulang aktibong gamitin lamang noong dekada 80, at ito ay magagamit lamang sa mataas na dalubhasang mga institusyong medikal. Ang pinakaunang mga istasyon at mga sentro ng pagsasalin ng dugo, venereology at mga institusyong panggagamot sa mga nakakahawang sakit ay nakagamit ng mga immunoenzyme analyzer. Ito ay dahil sa mabilis na pagkalat ng "salot ng ika-20 siglo" - AIDS, at ang mga kagyat na diagnostic at therapeutic na mga hakbang ay kinakailangan.

Mga posibilidad ng pamamaraan

Ang saklaw ng aplikasyon ng pagsusuri sa dugo ng ELISA ay medyo malawak - sa sandaling ito ay imposibleng isipin kung gaano magiging kumplikado ang paghahanap para sa sanhi ng maraming mga sakit. Ang ganitong pananaliksik ay ginagamit na ngayon sa halos lahat ng medikal na larangan, maging sa oncology. Bagaman ito ay mahirap para sa mga walang alam na maunawaan, sa ibang Pagkakataon nang maisakatuparan ito, posible na mailigtas ang buhay ng mga pasyente sa pamamagitan ng pagtuklas ng tumor sa maagang yugto.

Mahalaga! Ang ELISA ay isang pagsusuri sa dugo na nagpapakita ng mga marker na katangian ng tiyak malignant na mga proseso, na ginagawang posible na matukoy ang sakit sa oras na walang ibang paraan ang makakagawa nito.

Sa mga modernong diagnostic center, mga pagsusuri sa laboratoryo ay ipinakita hindi lamang sa mga marker ng tumor - nilagyan sila ng isang kahanga-hangang arsenal ng mga panel para sa pagsasagawa ng diagnosis na ito. Sa kanilang tulong, maaari mong makilala ang maraming mga kondisyon ng pathological, tulad ng mga abnormalidad sa hormonal At mga nakakahawang proseso ng iba't ibang pinagmulan.

Bilang karagdagan, ang pagsasagawa at pagbibigay-kahulugan sa isang pagsusuri sa dugo ng ELISA ay magiging posible upang masubaybayan ang epekto ng mga gamot sa katawan ng isang taong may sakit at maging sa isang hayop. Ang huli ay malawakang ginagamit sa mga klinika ng beterinaryo, na tumutulong na mapanatili ang kalusugan ng ating mga alagang hayop o tagapagpakain, na tinitiyak ang isang matatag na supply ng karne, mga produkto ng pagawaan ng gatas at mga itlog, na mahalaga sa diyeta.

Kaya, bilang isang resulta ng pagkuha lamang ng ilang mililitro venous blood at ang diagnosis nito gamit ang ELISA method, ang doktor, na inilarawan ang mga materyales sa pananaliksik, ay magagawang matukoy:

• hormonal state, kabilang ang biologically active substances ng reproductive at thyroid gland, pati na rin ang adrenal glands;
• pagkakaroon ng bacterial at impeksyon sa viral(hepatitis B at C, syphilis, herpes, chlamydia, tuberculosis, myco- at ureaplasmosis, HIV, TORCH) at iba pang mga sakit na ganito;
• mga palatandaan ng aktibidad ng pathogen proseso ng pathological, na nagtapos sa pagbawi at pumasa sa yugto ng pagbuo ng mga antibodies (immune response).

Ang ganitong mga complex ay mas madaling makilala at maalis ng mga immune cell. Ang mga natitirang epekto sa anyo ng mga antibodies sa maraming mga kaso ay nakapaloob sa dugo para sa buhay, na halos binabawasan ang mga panganib muling impeksyon sa zero.

Mga uri ng immunoglobulin

Mayroong ilang mga uri ng antibodies, at bawat isa sa kanila ay kasangkot sa proseso ng immune response sa isang tiyak na yugto. Halimbawa, ang class M immunoglobulins (IgM) ay ang unang nabuo bilang tugon sa pagpasok ng antigen sa katawan. Ang kanilang pinakamataas na rate ay sinusunod sa mga unang araw ng sakit.

Mga uri ng immunoglobulin na ginagamit sa ELISA

Pagkatapos ang immune system ay naglalabas ng klase G IGs (IgG) sa plasma, na responsable para sa kumpletong pagkasira ng mga antigen at pagbawi ng pasyente. Nang maglaon, patuloy silang nasa dugo, at sa gayon ay inihahanda ang immune system para sa paulit-ulit na pagkakalantad sa isang magkaparehong pathogen. Ito ay kung paano gumagana ang pagbabakuna. Kapag ang mga mahina na antigen ng mga pathological microorganism ay ipinakilala, maraming mga immunoglobulin ang lumilitaw at nananatiling nagpapalipat-lipat sa plasma.

Ang mga pangunahing bagay ng interes para sa mga diagnostic sa laboratoryo Ang mga klase ng Ig M, G at A ay isinasaalang-alang. Batay sa antas ng kanilang konsentrasyon, maaari mong matukoy ang yugto ng sakit at malaman kung anong mga nakakahawang sakit ang mayroon ang isang tao sa kanyang buhay. Halimbawa, maaari mong suriin kung mayroong kasaysayan bulutong o rubella. Sa doktor upang malaman kung ito ay naroroon tiyak na uri AT o AG sa katawan ng pasyente o sa konsentrasyon ng anumang hormone, hindi na kailangang magreseta ng maraming mga pagsubok sa laboratoryo - sapat na upang magsulat ng isang referral para sa ELISA.

Ang kakanyahan ng pamamaraan

Ang pamamaraan ng pananaliksik ay batay sa ilang mga pagpipilian (direkta at hindi direktang - mapagkumpitensya at hindi mapagkumpitensya) para sa pagsasagawa ng mga nakatalagang gawain, bawat isa sa kanila ay inilaan para sa mga tiyak na layunin. Ang diskarte na ito ay nagbibigay-daan para sa mga naka-target na paghahanap, at sa madaling panahon kilalanin ang sanhi ng isang partikular na patolohiya. Upang makita ang mga Ig ng iba't ibang mga kategorya ng klase Ang isang 96-well plate (polystyrene panel) ay ginagamit, at ang mga sorbed recombinant na protina ay matatagpuan sa mga balon nito. Gumaganap sila bilang mga antigen, at paunang yugto ay nasa solid phase.

Kapag pumasok sila sa isang balon na may plasma ng dugo, kinikilala ng mga antigen o antibodies ang bagay dahil sa kanilang direksyon at bumubuo ng isang complex (AG - AT). Ang pagbuo na ito ay naayos ng isang enzyme compound (conjugate), na kung saan ay magpapakita ng sarili bilang isang nagbago na kulay ng butas. Ginagawa ang ELISA gamit ang mga partikular na sistema ng pagsubok na ginawa sa mga dalubhasang laboratoryo at nilagyan ng isang buong hanay ng mga reagents.

Ang pagsusuri na ito ay maaaring isagawa gamit ang mga washer at reading spectrometer, ngunit nangangailangan sila ng manu-manong paggawa. Siyempre, ito ay ilang beses na mas maginhawa at mas mabilis para sa isang laboratoryo technician na isagawa ang lahat ng mga manipulasyon sa ganap na automated na mga instrumento. Kapag ginagamit ang mga ito, ang mga kawani ng laboratoryo ay napalaya mula sa isang malaking halaga ng monotonous na aktibidad - paghuhugas, pag-instill at iba pang gawain, ngunit hindi lahat mga institusyong medikal kayang bumili ng ganitong mamahaling kagamitan

Samakatuwid, maraming mga ospital at mga institusyong diagnostic ang patuloy na nagsasagawa ng ELISA sa makalumang paraan - gamit ang mga semi-awtomatikong makina.

Ang interpretasyon ng mga materyales sa pananaliksik ay responsibilidad lamang ng isang espesyalista sa diagnostic ng laboratoryo - siya lamang ang makakapagsabi ng mga resulta tungkol sa mga detalye at subtleties ng kurso ng sakit. Sa kasong ito, dapat isaalang-alang ng doktor ang posibilidad na makakuha ng maling negatibo o maling positibong mga sagot.

Mga materyales sa pag-decode

Ang resulta ng mataas na kalidad na immunoassay diagnostics ay dapat na isang hindi malabo na konklusyon - kung ang nais na mikroorganismo ay natagpuan o hindi sa isang ibinigay na sample ng dugo. Ang quantitative analysis ay magsasaad ng antas ng konsentrasyon at maaaring ipahayag sa dalawang paraan - isang numerical na halaga o ang bilang ng mga "+" na palatandaan.

Nasuri na mga tagapagpahiwatig

Maingat na sinusuri ng proseso ng pananaliksik ang mga pangunahing immunoglobulin na kasangkot sa immune response, tulad ng:

• IgM - ang pagtuklas ng klase na ito ay nangangahulugan ng pag-unlad talamak na anyo nakakahawang sakit. Ang isang negatibong resulta sa paghahanap para sa IgM ay maaaring maging katibayan ng kawalan ng nais na pathogen o ang paglipat ng sakit sa talamak na kurso.
• Ang IgA ay ang kahulugan ng klase na ito sa kawalan ng IgM sa karamihan ng mga kaso, isang senyales ng isang talamak o nakatagong anyo ng pag-unlad ng isang nakakahawang sakit.
• IgM at IgA (sabay-sabay na presensya) - ang mga positibong resulta para sa parehong mga uri ay nagpapahiwatig ng pinakadulo ng talamak na anyo ng patolohiya.
• IgG – ang presensya nito ay nagpapahiwatig ng pagbabago ng sakit sa talamak na anyo o para sa pagbawi at pagbuo ng kaligtasan sa sakit sa tinutukoy na ahente.

Ang hitsura at akumulasyon ng isang partikular na klase ng IG ay nangyayari sa iba't ibang yugto ng panahon. Kaya, halimbawa, unang lumitaw ang IgM, humigit-kumulang 5 araw pagkatapos ng pagkakalantad sa pathogen. Ang mga IG ay nananatili sa dugo sa loob ng mga 5-6 na linggo at pagkatapos ay unti-unting nawawala. Sa oras na ito, magagamit ang mga ito para sa pagpapasiya ng ELISA. Humigit-kumulang 3-4 na linggo pagkatapos ng pagsisimula ng sakit, lumilitaw ang IgG, na maaaring manatili nang ilang buwan pagkatapos. Ngunit hindi sila palaging makikita sa pagsusuri.

Ang IgA ay nabuo sa dugo sa loob ng 2-4 na linggo, na may 20% ng mga ito ay nakapaloob sa suwero, at 80% sa mga pagtatago ng mga mucous membrane. Bilang isang patakaran, ang mga immunoglobulin na ito ay nawawala sa loob ng 2-9 na linggo, na nagpapahiwatig ng pagkasira ng pathogen at pagbawi ng pasyente. Kung ang ELISA ay nagpapakita pa rin ng pagkakaroon ng IgA, kung gayon ito ay nagpapahiwatig ng paglipat ng proseso sa isang talamak na anyo.

Mga opsyon para sa mga resulta ng pagsusuri

Depende sa data na natanggap, ang mga sagot sa ELISA ay maaaring maibigay sa isang form sa anyo ng isang talahanayan na may buong listahan lahat ng AT at AG at nagsasaad ng positibo o negatibong reaksyon. Sa ilang partikular na sitwasyon, ipapakita ang isang quantitative value - malakas na positibo, positibo, mahinang positibo o negatibong resulta. Ang pangalawang opsyon ay nagpapahiwatig ng dami ng AT na nakapaloob sa sample ng dugo na pinag-aaralan.

Mga opsyon para sa pagbibigay-kahulugan sa mga materyales ng ELISA

Bilang karagdagan sa mga halaga sa itaas, sinusuri ng proseso ng ELISA ang isa pang parameter ng dami - ang index ng AT avidity, na kinakalkula bilang isang porsyento. Ipinapakita nito kung gaano katagal ang sakit - iyon ay, mas mataas ang tagapagpahiwatig, mas matagal ang kinakailangan para sa pagbuo ng patolohiya.

Alternatibong pamamaraan ng ELISA

Ang pagsusuri sa dugo ng enzyme immunoassay ay isang medyo kilala at karaniwang diagnosis. Maaaring hindi pa ito narinig ng ilang tao, ngunit may isa pang hindi gaanong kilala itong pag aaral, kung saan kumukuha ng sample na hindi dugo. Ang pamamaraan na ito ay tinatawag na isang stool occult blood test, at sa maraming mga kaso pinapayagan ka nitong maiwasan ang mga karagdagang nakakapagod na pamamaraan, na sinamahan din ng hindi kasiya-siyang sensasyon.

Ginagawang posible ng ELISA test para sa occult blood (mga molekula ng hemoglobin) na matukoy ang pagdurugo ng mga organo sistema ng pagtunaw, kahit na menor de edad, ang mga palatandaan kung saan, gaya ng sinasabi nila, ay hindi makikita sa dumi ng pasyente sa mata. Naka-link na immunosorbent assay nakatagong dugo sa feces ng tao sa isang maikling panahon maaari itong magpakita ng mga peptic ulcer, polyposis, diverticulosis, mga bukol, na sa mga unang yugto ay hindi sinamahan ng ilang mga sintomas.

Ngayon, libu-libong uri ng enzyme-linked immunosorbent diagnostic test system ang nilikha, na nagbibigay ng kakayahang makita ang mga AT at AG mula sa isang malaking listahan ng mga pathologies. Samakatuwid, ang pagsusuri na ito ay ginagamit sa halos lahat ng sangay ng medisina, para sa anumang kategorya ng edad. At ang ganap na hindi nakakapinsala nito ay nagpapahintulot na magamit ito kapwa sa panahon ng pagbubuntis at para sa pag-diagnose ng mga mahinang pasyente.

Kaugnay ng pag-unlad ng mga teknolohiyang cellular, molecular biology, genetics, physics, chemistry at ilang iba pang high-tech na disiplina sa araw-araw na pagsasanay bagong high-precision at high-tech na mga pamamaraan. Ang mga interdisciplinary trend na ito ay nakakaapekto sa parehong larangan ng medikal na kaalaman at mga kaugnay na lugar ng mga problema sa biyolohikal at biochemical. Sa nakalipas na sampung taon, tinawag ang isang paraan ng mga diagnostic ng klinikal na laboratoryo naka-link na immunosorbent assay.

Sa pangkalahatan, ang mga teknolohiya ng immunological enzymatic at radiological na mga reaksyon ay malawakang ginagamit sa pag-type ng mga cell, cell culture, at iba't ibang tissue mula noong unang bahagi ng 80s ng ika-20 siglo. Gayunpaman, ang mga pamamaraang ito ay napaka-labor-intensive, hindi pinag-isa, hindi standardized, na humadlang sa kanilang paggamit para sa mga layunin ng diagnostic at paggamot sa isang mass scale. Ang ganitong mga pamamaraan ay ginamit lamang ng makitid, masinsinang kaalaman at lubos na dalubhasang mga laboratoryo.

Gayunpaman, sa pag-unlad ng teknolohiya, microtechnology, at paggawa ng iba't ibang mga biopolymer na materyales, naging posible na makagawa ng mga ready-made enzyme-linked immunosorbent diagnostic kit na maaaring magamit ng mga laboratoryo ng mga pangkalahatang institusyong medikal. Ang ELISA ay malawakang ginagamit upang masuri ang lahat ng uri ng mga impeksiyon (chlamydia, syphilis, cytomegalovirus, toxoplasmosis, herpes, atbp.), parehong talamak at talamak, pati na rin mga nakatagong anyo, na nangyayari nang walang mga klinikal na sintomas. Ginagamit din ang paraang ito upang makontrol ang mga malalang sakit. Subukan nating alamin kung anong uri ng pamamaraan ito at anong mga prinsipyo ang pinagbabatayan nito?

Mga bahagi ng enzyme immunoassay - immune reaction at enzymatic reaction

Ang enzyme immunoassay, gaya ng ipinahihiwatig ng pangalan, ay binubuo ng dalawang magkaibang sangkap - immune reaksyon at reaksyong enzymatic. Ang immune reaction ay gumagawa ng pagbubuklod ng mga biological molecule, mga elemento ng isang cell o microorganism, na talagang sinusubukan nilang tuklasin, at ang enzyme reaction ay nagpapahintulot sa iyo na makita at masukat ang resulta ng immunological reaction. Iyon ay, ang immune reaction ay bahagi ng isang kumplikadong pamamaraan na aktwal na nakikita ang nais na mikrobyo. At ang reaksyon ng enzyme ay bahagi ng kumplikadong pamamaraan na nagbibigay-daan sa iyo upang isalin ang resulta ng immune reaction sa form nakikita ng mata, at naa-access para sa pagsukat gamit ang mga nakagawiang pamamaraan ng kemikal. Batay sa istrukturang ito ng paraan ng enzyme immunoassay, susuriin natin nang hiwalay ang magkabilang bahagi nito.

Immune reaction, ano ito? Ano ang isang antibody o antigen?

Ano ang immune response? Ano ang isang antigen?
Una sa lahat, tingnan natin kung ano ang mga immune reaction. Mga reaksyon ng immune– ito ay mga tiyak na reaksyon ng pagbubuklod ng isang antigen sa isang antibody na may pagbuo ng isang immune complex. Ano ang ibig sabihin nito? Sa ibabaw ng bawat cell ng anumang organismo mayroong mga espesyal na istruktura na tinatawag antigens. Ang mga antigen sa pangkalahatan ay mga molekula na nagdadala ng impormasyon tungkol sa isang cell (katulad ng impormasyon sa badge ng isang tao, na nagpapahiwatig ng pangunahing data ng taong iyon).

Mga indibidwal at species na antigens - ano ang mga ito? Bakit kailangan ang mga antigen na ito?

Available indibidwal na antigens, iyon ay, likas lamang sa partikular na organismong ito. Ang mga indibidwal na antigen na ito ay iba para sa lahat ng tao; may ilan na magkapareho sa isa't isa, ngunit magkaiba pa rin. Walang dalawang magkaparehong kopya ng mga indibidwal na antigen sa kalikasan!

Ang pangalawang pangunahing uri ng antigen ay mga antigen ng species, ibig sabihin, likas sa alinman tiyak na species Buhay na nilalang. Halimbawa, ang mga tao ay may sariling antigen ng species, karaniwan sa lahat ng tao, ang mga daga ay may sariling antigen ng species ng mouse, atbp. Sa ibabaw ng bawat cell, isang tiyak at indibidwal na antigen ay kinakailangang naroroon.

Ang species antigen ay ginagamit ng mga selula ng immune system upang makilala ang "kaibigan o kaaway".

Paano nangyayari ang pagkilala sa antigen?

Ang immune cell ay nakikipag-ugnayan sa kahina-hinalang cell at gumagawa ng pagkakakilanlan batay sa indibidwal na antigen. Sa isip immune cell"naitala" kung ano ang hitsura ng "sariling antigen". Kaya, kung ang antigen ng isang kahina-hinalang cell ay tumutugma sa paglalarawang "self antigen," kung gayon ang cell na ito ng sariling katawan ay hindi nagdudulot ng panganib. Pagkatapos ang immune cell ay "nagkakatali" at umalis. At kung ang antigen ay hindi tumutugma sa paglalarawan ng "sarili," ang immune cell ay kinikilala ang cell na ito bilang "banyaga," at samakatuwid ay potensyal na mapanganib sa buong organismo. Sa kasong ito, ang immune cell ay hindi "makakawala", ngunit nagsisimulang sirain ang mapanganib na bagay. Ang katumpakan ng naturang immunological recognition ay kamangha-manghang - 99.97%. Halos walang mga pagkakamali!

Ano ang isang antibody, immune complex?
Ano ang isang antibody?

Ang antibody ay isang espesyal na molekula na matatagpuan sa ibabaw ng isang immune cell. Ito ang antibody na nagbubuklod sa mga antigen ng kahina-hinalang selula. Susunod, ang antibody ay nagpapadala ng impormasyon sa loob ng cell, kung saan nangyayari ang pagkilala, at tumatanggap ng return signal ng dalawang uri, "self" o "foreign." Kapag tumatanggap ng signal na "sarili", sinira ng antibody ang bono sa antigen at pinakawalan ang cell.

Ano ang immune complex?
Kapag ang signal ay "stranger," iba ang lalabas ng sitwasyon. Hindi sinisira ng antibody ang koneksyon sa antigen, ngunit, sa kabaligtaran, sa pamamagitan ng pagpapadala ng mga tiyak na signal, ay nagiging sanhi ng "reinforcement". Biologically, nangangahulugan ito na ang ibang mga antibodies na matatagpuan sa ibang bahagi ng cell ay nagsisimulang lumipat sa lugar kung saan nagmumula ang signal ng panganib at bumubuo rin ng isang bono sa pagitan ng kanilang mga sarili at ng nakuhang antigen. Sa huli, ang antigen ay lumalabas na napapalibutan sa lahat ng panig at mahigpit na nakakabit. Ang antigen + antibody complex na ito ay tinatawag na immune complex. Mula sa sandaling ito, nagsisimula ang paggamit ng antigen. Ngunit ngayon hindi kami interesado sa mga detalye ng proseso ng neutralisasyon ng antigen.

Mga uri ng antibodies (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Ang mga antibodies ay mga istruktura ng protina na, nang naaayon, ay mayroon pangalan ng kemikal, na ginagamit bilang kasingkahulugan para sa salitang antibody. Kaya, antibodies = immunoglobulins.

Mayroong 5 uri ng immunoglobulins (Ig), na nagbubuklod sa iba't ibang uri ng antigens sa iba't ibang lugar katawan ng tao(halimbawa, sa balat, sa mauhog lamad, sa dugo, atbp.). Iyon ay, ang mga antibodies ay may dibisyon ng paggawa. Ang mga immunoglobulin na ito ay tinatawag ng mga titik ng alpabetong Latin - A, M, G, D, E at itinalaga bilang mga sumusunod - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Sa diagnosis, isang uri lamang ng antibody ang ginagamit, na siyang pinaka-espesipiko para sa mikrobyo na natutukoy. Iyon ay, palaging nangyayari ang pagbubuklod ng ganitong uri ng antibody sa nakitang antigen. Ang pinakakaraniwang ginagamit ay IgG at IgM.

Ito ang prinsipyong ito ng immune reaction (ang natatanging katumpakan at pagtitiyak ng pagkilala sa biological na bagay na tinutukoy) ang pinagbabatayan ng enzyme immunoassay. Dahil sa mataas na katumpakan ng mga antibodies sa pagkilala sa mga antigen, ang katumpakan ng buong paraan ng enzyme immunoassay ay din pinakamataas.

Enzymatic na reaksyon

Aling reaksyon ang enzymatic? Ano ang affinity, substrate at produkto ng isang reaksyon?
Magpatuloy tayo upang isaalang-alang ang reaksyon ng enzymatic sa gawain ng paraan ng immunoassay ng enzyme.

Ano ang isang reaksyong enzymatic?

Ang isang enzymatic na reaksyon ay kemikal na reaksyon, kung saan ang isang sangkap ay na-convert sa isa pa sa pamamagitan ng pagkilos ng isang enzyme. Ang sangkap kung saan kumikilos ang enzyme ay tinatawag substrate. At ang sangkap na nakuha bilang isang resulta ng pagkilos ng isang enzyme ay tinatawag produkto ng reaksyon. Bukod dito, ang kakaibang reaksyon ng enzymatic ay tulad na ang isang tiyak na enzyme ay kumikilos lamang sa isang tiyak na substrate. Ang pag-aari na ito ng isang enzyme upang makilala ang "nito" na substrate ay tinatawag pagkakaugnay.

Kaya, ang bawat enzyme ay nagsasagawa lamang ng isang reaksyon na tiyak dito. Mga enzyme sa biyolohikal na mundo Mayroong napakaraming kilala, pati na rin ang mga reaksyong enzymatic. Sa mga diagnostic na immunosorbent na may kaugnayan sa enzyme, kakaunti lamang ang mga reaksyon ng enzymatic na ginagamit - hindi hihigit sa 10. Kasabay nito, ang mga naturang reaksyon ng enzymatic ay pinili, ang produkto kung saan ay may kulay na mga sangkap. Bakit dapat kulayan ang mga produkto ng isang reaksyong enzymatic? Dahil upang makalkula ang konsentrasyon ng isang sangkap mula sa isang kulay na solusyon, mayroong isang simpleng pamamaraan ng kemikal - colorimetry.

Paraan ng colorimetry - kakanyahan at prinsipyo

Colorimetry ginagamit ang pagsukat ng density ng kulay ng solusyon, at ang konsentrasyon ng sangkap ay kinakalkula mula sa density ng kulay. Sa kasong ito, espesyal na aparato– sinusukat ng colorimeter ang density ng kulay ng solusyon. Sa colorimetry, mayroong dalawang posibleng pagpipilian para sa pagtitiwala ng density ng kulay sa konsentrasyon ng isang sangkap - isang direktang proporsyonal na pag-asa o isang inversely proportional na pag-asa. Sa isang direktang proporsyonal na relasyon, mas mataas ang konsentrasyon ng sangkap, mas matindi ang density ng kulay ng solusyon. Sa isang inversely proportional na relasyon, mas mataas ang konsentrasyon ng sangkap, mas mababa ang density ng kulay ng solusyon. Sa teknikal, ito ay nangyayari tulad nito: ang ilang mga solusyon na may kilalang konsentrasyon ng isang sangkap ay kinuha, ang density ng mga solusyon na ito ay sinusukat, at ang isang graph ay binuo ng dependence ng konsentrasyon sa density ng kulay ( tsart ng pagkakalibrate).

Susunod, ang densidad ng kulay ng solusyon, na tinutukoy ang konsentrasyon, ay sinusukat, at mula sa graph ng pagkakalibrate, matatagpuan ang halaga ng konsentrasyon na tumutugma sa antas ng sinusukat na density ng kulay ng solusyon. Sa modernong awtomatikong mga colorimeter, ang pagkakalibrate ay natupad nang isang beses lamang, pagkatapos ang device mismo ay bubuo ng calibration curve, na nananatili sa memorya ng device, at awtomatikong nangyayari ang pagsukat.

Ang mga sumusunod na enzyme ay kadalasang ginagamit sa enzyme immunoassay: peroxidase, alkaline phosphatase, avidin.

Paano pinagsama ang mga immunological at enzymatic na reaksyon sa isang enzyme immunoassay? Ngayon ay magpapatuloy tayo upang isaalang-alang ang enzyme immunoassay mismo. Anong mga yugto ang kasama nito at ano ang nangyayari sa panahon ng mga reaksyong ito? Ang enzyme immunoassay ay maaaring direkta at hindi direkta.

Direktang enzyme immunoassay - mga yugto ng pagpapatupad

Sa isang direktang enzyme immunoassay, ang mga antibodies sa nakitang antigen ay ginagamit, na sinamahan ng isang partikular na label. Ang partikular na label na ito ay ang substrate ng reaksyon ng enzymatic.

Pagkakabit ng mga antigen sa ibabaw ng balon at kumbinasyon ng antigen na may antibody

Paano isinasagawa ang direktang enzyme immunoassay? Ang biological na materyal ay kinuha (dugo, scrapings mula sa mauhog lamad, smears) at inilagay sa mga espesyal na butas. Ang biological na materyal ay naiwan sa mga balon sa loob ng 15-30 minuto upang ang mga antigen ay makadikit sa ibabaw ng mga balon. Susunod, ang mga antibodies sa nakitang antigen ay idinagdag sa mga balon na ito. Nangangahulugan ito na kapag nakita ang mga antigen, halimbawa, syphilis, ang mga antibodies laban sa syphilis antigens ay idinagdag. Ang mga antibodies na ito ay nakukuha sa industriya, at ang mga laboratoryo ay bumibili ng mga handa na kit. Ang pinaghalong ito ng materyal na pansubok at mga antibodies ay naiwan sa loob ng ilang oras (mula 30 minuto hanggang 4-5 na oras) upang ang mga antibodies ay mahanap at makontak ang "kanilang" antigen. Ang higit pa biological sample antigens, mas maraming antibodies ang magbubuklod sa kanila.

Pag-alis ng mga "dagdag" na antibodies

Tulad ng ipinahiwatig, ang mga antibodies ay nauugnay din sa isang partikular na label. Dahil ang mga antibodies ay idinagdag nang labis, hindi lahat ng mga ito ay magbubuklod sa mga antigen, at kung walang antigen sa sample, kung gayon, nang naaayon, walang isang antibody ang magbubuklod sa gustong antigen. Upang maalis ang "dagdag" na mga antibodies, ang mga nilalaman mula sa mga balon ay ibinubuhos lamang. Bilang resulta nito, ang lahat ng "dagdag" na antibodies ay tinanggal, at ang mga nakagapos sa mga antigen ay nananatili, dahil ang mga antigen ay "nakadikit" sa ibabaw ng mga balon. Ang mga balon ay hinuhugasan ng maraming beses gamit ang isang espesyal na solusyon, na nagbibigay-daan sa iyo upang hugasan ang lahat ng "dagdag" na antibodies.

Susunod, nagsisimula ang pangalawang yugto - ang reaksyon ng enzymatic. Ang isang solusyon na may enzyme ay idinagdag sa mga hugasan na balon at iniwan sa loob ng 30-60 minuto. Ang enzyme na ito ay may kaugnayan sa sangkap (tiyak na etiketa) kung saan nakagapos ang mga antibodies. Ang enzyme ay nagsasagawa ng isang reaksyon na nagpapalit ng espesipikong label na ito (substrate) sa isang may kulay na substansiya (produkto). Pagkatapos, gamit ang colorimetry, ang konsentrasyon ng may kulay na sangkap na ito ay matatagpuan. Dahil ang partikular na label na ito ay nauugnay sa mga antibodies, nangangahulugan ito na ang konsentrasyon ng may kulay na produkto ng reaksyon ay katumbas ng konsentrasyon ng mga antibodies. At ang konsentrasyon ng mga antibodies ay katumbas ng konsentrasyon ng mga antigens. Kaya, bilang resulta ng pagsusuri, nakatanggap kami ng sagot tungkol sa konsentrasyon ng nakitang mikrobyo o hormone.

Ito ay eksakto kung paano gumagana ang direktang enzyme immunoassay. Gayunpaman, ngayon ang hindi direktang enzyme immunoassay ay mas madalas na ginagamit, dahil ang sensitivity at katumpakan ng hindi direkta ay mas mataas kaysa sa direkta. Kaya, lumipat tayo sa hindi direktang enzyme immunoassay.

Hindi direktang enzyme immunoassay - mga yugto ng pagpapatupad

Mayroong dalawang yugto sa hindi direktang enzyme immunoassay. Sa unang yugto, ang mga walang label na antibodies sa mga nakitang antigen ay ginagamit, at sa ikalawang yugto, ang mga may label na antibodies ay ginagamit sa unang walang label na mga antibodies. Iyon ay, ito ay hindi direktang pagbubuklod ng isang antibody sa isang antigen, ngunit isang dobleng kontrol: pagbubuklod ng mga antibodies sa isang antigen, na sinusundan ng pagbubuklod ng mga pangalawang antibodies sa antibody + antigen complex. Bilang isang patakaran, ang mga antibodies para sa unang yugto ay mouse, at para sa pangalawang - kambing.

Pag-aayos ng mga antigen sa ibabaw ng balon at pagbubuklod ng antigen sa isang walang label na antibody
Tulad ng para sa direktang enzyme immunoassay, ang biological na materyal ay kinokolekta - dugo, scrapings, smears. Ang biyolohikal na materyal na pinag-aaralan ay ipinapasok sa mga balon at iniwan ng 15-30 minuto para ang mga antigen ay dumikit sa ibabaw ng mga balon. Pagkatapos ay ang mga antibodies na walang label sa mga antigen ay idinaragdag sa mga balon at iniiwan sa loob ng isang panahon (1-5 oras) upang ang mga antibodies ay magbubuklod sa "kanilang" antigens at bumuo ng isang immune complex ( Unang hakbang). Pagkatapos nito, ang mga "dagdag" na hindi nakatali na antibodies ay aalisin sa pamamagitan ng pagbuhos ng mga nilalaman ng mga balon. Hugasan gamit ang isang espesyal na solusyon upang ganap na maalis ang lahat ng hindi nakatali na antibodies.

Pagbubuklod ng may label na antibody sa antigen + unlabeled antibody complex
Pagkatapos nito ay kinuha nila ang pangalawang may label na antibodies, idagdag ang mga ito sa mga balon at muling umalis nang ilang sandali - 15-30 minuto ( ikalawang yugto). Sa panahong ito, ang mga may label na antibodies ay nagbubuklod sa mga una - walang label - at bumubuo ng isang kumplikadong - antibody + antibody + antigen. Gayunpaman, ang parehong may label at walang label na mga antibodies ay idinagdag sa mga balon nang labis. Samakatuwid, kinakailangan na muling alisin ang "dagdag" na may label na mga antibodies na hindi nakagapos sa mga walang label na antibodies. Upang gawin ito, ulitin ang pamamaraan ng pagbuhos ng mga nilalaman ng mga balon at paghuhugas ng isang espesyal na solusyon.

Enzymatic reaction - pagbuo ng isang kulay na tambalan
Pagkatapos nito, idinagdag ang isang enzyme na nagsasagawa ng reaksyon ng pag-convert ng "label" sa isang kulay na sangkap. Ang kulay ay bubuo sa loob ng 5-30 minuto. Pagkatapos ay isinasagawa ang colorimetry at kinakalkula ang konsentrasyon ng may kulay na sangkap. Dahil ang konsentrasyon ng may kulay na substansiya ay katumbas ng konsentrasyon ng mga may label na antibodies, at ang konsentrasyon ng mga may label na antibodies ay katumbas ng konsentrasyon ng mga walang label na antibodies, na, naman, ay katumbas ng konsentrasyon ng antigen. Kaya, nakukuha namin ang konsentrasyon ng nakitang antigen.
Ang dobleng kontrol na ito sa anyo ng paggamit ng dalawang uri ng antibodies ay naging posible upang mapataas ang pagiging sensitibo at pagtitiyak ng paraan ng immunoassay ng enzyme. Sa kabila ng pagpapahaba ng oras ng pagsusuri at ang pagsasama ng mga karagdagang yugto, ang mga pagkalugi na ito ay binabayaran ng katumpakan ng resulta. Iyon ang dahilan kung bakit sa kasalukuyan ang karamihan sa mga pamamaraan ng enzyme immunoassay ay hindi direktang enzyme immunoassays.

Anong mga sakit ang nakita ng enzyme immunoassay?

Magpatuloy tayo upang isaalang-alang kung anong mga sakit at kung anong mga biologically active substance ang nakita ng enzyme immunoassay. Ang mga sangkap na nakita ng enzyme immunoassay ay ipinakita sa talahanayan.

Mga hormone at marker ng sakit sa thyroid	Ang thyroid peroxidase (TPO)
	Thyroglobulin (TG)
	Thyroid-stimulating hormone(TSG)
	Thyroxine (T4)
	Triiodothyronine (T3)
	Libreng thyroxine (T4)
	Libreng triiodothyronine (T3)
Diagnosis ng reproductive function	Luteinizing hormone (LH)
	Follicle stimulating hormone (FSH)
	Prolactin
	Progesterone
	Estradiol
	Testosteron
	Cortisol
	Steroid binding globulin (SBG)
	Alphafetoprotein (AFP)
Mga marker ng tumor	Chorionic gonadotropin (CG)
	Prostate-specific antigen (PSA)
	SA – 125
	SA – 19.9
	CYFRA-21-1
	M – 12 (SA – 15.3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	Alveomucin
	K – kadena
	L - kadena
	Tumor necrosis factor (TNFα)
	γ - interferon
	Carcinoembryonic antigen (CEA)
Diagnosis ng mga nakakahawang sakit

Ang enzyme immunoassay technique ay ginagamit sa iba't ibang sangay ng medisina. Ngunit sa karamihan ng mga kaso, ang pamamaraang ito ay ginagamit upang masuri ang isang malawak na hanay ng mga nakakahawang sakit, tulad ng human immunodeficiency virus, hepatitis, herpes at iba pang mga impeksyon sa ari. Ginagamit din ang enzyme immunoassay upang matukoy ang mga marker ng tumor ng iba't ibang pinagmulan, matukoy ang mga hormone, at masuri ang reproductive function ng katawan. Ang materyal para sa enzyme immunoassay ay dugo ng tao.

Ano ito

Ang pagsusuri sa dugo ng enzyme immunoassay ay isang pagsubok sa laboratoryo immunological na pag-aaral dugo, kung saan nangyayari ang qualitative at quantitative measurements ng antibodies (antigens), pati na rin ang mga hormone. Ang pamamaraang ito ay nagbibigay ng hanggang 90% na katumpakan sa pag-diagnose ng sakit.

Gumagamit ang mga medikal na laboratoryo ng ilang mga opsyon para sa pagsasagawa nito, na nakakaapekto sa oras ng turnaround para sa mga resulta. Ngunit sa karaniwan, ang mga resulta ng pagsusuri ay inilabas sa loob ng 1-10 araw pagkatapos ng donasyon ng dugo.

Anong mga antibodies ang sinusuri?

Sa ganitong uri ng pagsusuri sa dugo, ang mga antibodies ng iba't ibang uri ay natutukoy - ito ay mga immunoglobulin ng klase M, A, G (JgM, JgA, JgG). Ang kanilang akumulasyon ay nangyayari sa iba't ibang mga agwat ng oras. Ang mga immunoglobulin ng klase M ay nagsisimulang lumitaw muna (ang ikalimang araw pagkatapos ng pagsisimula ng sakit). Ang gayong mga immunoglobulin ay nananatili sa katawan sa loob ng lima hanggang anim na linggo, pagkatapos nito ay nagsisimula silang mawala sa dugo ng katawan. Sa panahong ito natutukoy ang mga antibodies ng klase M.

Ang pangalawang lalabas ay mga immunoglobulin ng klase G (pagkatapos ng tatlo hanggang apat na linggo). Nanatili sila sa katawan ng ilang buwan o taon. Sa panahon ng isang enzyme-linked immunosorbent test (ELISA) at interpretasyon ng mga resulta nito, maaaring matukoy ang pagtaas ng mga antibodies ng klase G. Ito ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng impeksyon o reinfection.

Lumilitaw ang mga antibodies ng Class A sa dugo sa loob ng dalawa hanggang apat na linggo. Ngunit 20% lamang ng mga ito ang naroroon sa suwero ng dugo. Ang natitira ay bahagi ng pagtatago ng mga mucous membrane. Ang mga immunoglobulin ng Class A ay nagsisimulang mawala sa pagitan ng dalawang linggo at dalawang buwan. Ang prosesong ito ay katibayan ng pagkasira ng impeksiyon sa katawan. Kung, pagkatapos ng paggaling ng isang tao, ang isang paulit-ulit na enzyme-linked immunosorbent test ay ginawa at ang mga resulta ay na-decipher at nagpakita ng pagkakaroon ng class A antibodies, ito ay katibayan. talamak na impeksiyon.

Transcript ng pagsusuri

Ang pag-decode ng mga resulta ng pagsusuri ay maaaring tumagal sa mga sumusunod na halaga:

• JgM (-), JgG (-), JgA (-) – kawalan ng immunity sa impeksyon;
• JgM (-), JgG (+), JgA (-) – ang pagkakaroon ng post-vaccination o post-infectious immunity;
• JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) – pagkakaroon ng matinding impeksiyon;
• JgM (+), JgG (+), JgA (+) - pagkakaroon ng exacerbation ng malalang impeksiyon;
• JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) – pagkakaroon ng malalang impeksiyon;
• JgM (-) – pagbawi.

Sa transcript, (+) ay isang positibong resulta, at (–) ay isang negatibong resulta.

Bilang karagdagan sa paglilinaw sa mga klase ng antibodies, ang decoding ay naglalaman ng kanilang mga quantitative indicator. Ngunit tanging ang dumadating na manggagamot lamang ang makapagbibigay ng malawak na paliwanag.

Ang serum ng dugo ay isang malinaw na likido na may dilaw na tint. Pagkatapos ng pamumuo ng dugo, ito ay nahiwalay sa pamumuo ng dugo. Hindi naglalaman ng fibrin at nabuo na mga elemento.

Ang enzyme immunoassay ng serum ng dugo ay batay sa pakikipag-ugnayan ng isang antigen sa isang antibody, at ang isa sa mga ito ay naglalaman ng isang enzyme sa istraktura nito. Kapag nag-interact ang dalawang sangkap, dapat magbago ang kulay ng mga laman ng test tube. Ang mga resulta ay inihambing sa isang karaniwang sukat ng kulay, at ang antigen na naroroon sa materyal ay pagkatapos ay tinutukoy. Sa madaling salita, ang prinsipyo ng enzyme immunoassay ng blood serum ay maaaring ipaliwanag tulad ng sumusunod:

1. ang mga hanay ng mga antigen ay inihanda (halimbawa, mga nakakahawang ahente, allergens o hormones);
2. ang pasyente ay nag-donate ng dugo para sa pagsusuri, kung saan ang serum ay nakahiwalay sa laboratoryo;
3. ang materyal para sa pag-aaral ay idinagdag sa mga balon ng mga yari na kit, pagkatapos ay nangyayari ang isang reaksyon ng antigen-antibody;
4. ang natitirang serum ng dugo ay tinanggal, at ang mga nakitang antibodies ay kinikilala gamit ang mga tagapagpahiwatig.

Ang enzyme immunoassay ng blood serum ay itinuturing na maaasahan. Ngunit sa mga kaso kung saan ang dugo ay kinuha nang hindi tama para sa pagsusuri, o ang pamamaraan ng pananaliksik ay nilabag, o ang isang tao ay may mga nakatagong systemic na sakit, ang mga resulta ng isang enzyme immunoassay ng serum ng dugo ay maaaring maging mali.

Sinusuri ng enzyme immunoassay ng blood serum ang halos lahat ng hormones thyroid gland, mga marker ng tumor at iba't ibang uri mga impeksyon.

Kabilang sa mga thyroid hormone ang thyroglobulin (TG), thyroxine (T4), triiodothyronine (T3), libreng thyroxine (T4), libreng triiodothyronine (T3).

Mga pamantayan

Ang isang enzyme-linked immunosorbent test ay itinuturing na normal kung ang mga sumusunod na katanggap-tanggap na antas ng mga thyroid hormone ay naroroon:

• thyroglobulin (TG) - mga katanggap-tanggap na limitasyon 70 IU / ml;
• thyroxine (T4) – 64-146 nmol/l (50-113 ng/ml);
• triiodothyronine (T3) – 1.8-2.8 nmol/l (0.8-2.0 ng/ml);
• libreng thyroxine (T4) – 11-25 pmol/l (10-27 pg/ml);
• libreng triiodothyronine (T3) – 4.49-9.3 pmol/l (2.5-5.8 pg/ml).

Sa kaso ng isang pag-aaral ng mga sex hormone, ang isang enzyme immunoassay na pagsusuri ng dugo ay itinuturing na normal para sa mga kababaihan kung ang katawan ay naglalabas ng luteinizing hormone (LH) sa loob ng mga sumusunod na limitasyon:

• follicular phase ng cycle (mula sa unang araw ng regla hanggang ikalabindalawa-labing-apat) - 2-14 mU / l;
• yugto ng obulasyon ng cycle (mula sa ikalabindalawang araw hanggang ika-labing-apat na araw) - 24-150 mU / l;
• luteal phase ng cycle (mula sa ikalabinlima hanggang ikalabing-anim na araw hanggang sa simula ng susunod na regla) - 2-17 honey / l.

Karaniwan, ito ay kinukuha para sa mga lalaki kung ang sex hormone ay ginawa sa loob ng hanay na 0.5-10 mU/l.

Kapag nag-aaral ng talamak na gonadotropin (CG), ang mga halaga ng sanggunian ay nakasalalay sa kasarian ng tao.

• Sa mga lalaking nasa hustong gulang at hindi buntis na kababaihan Ang pamantayan ay itinuturing na antas ng hCG sa ibaba 5 mU/ml.
• Sa mga buntis na kababaihan, ang resulta ay depende sa tagal ng pagbubuntis at maaaring mula sa 25-49000 mU/ml.

Sinusuri ng isang enzyme-linked immunosorbent test ang maraming indicator ng kanser. Kabilang dito ang pagkakaroon ng prolactin, estradiol, progesterone, testosterone, steroid binding globulin (SBG) at iba pang mga marker. Ngunit ang interpretasyon ng resulta ng pagsusuri at ang mga pamantayan ng mga tagapagpahiwatig na ito ay dapat na isagawa lamang ng dumadating na manggagamot.

Bukod sa, ang pamamaraang ito nag-diagnose ng mga nakakahawang sakit (halimbawa, rubella, tigdas, tuberculosis, herpes, syphilis, hepatitis, pseudotuberculosis) at mga sakit sa autoimmune iba't ibang uri, at nagtatatag din ng immune status ng isang tao. Ngunit ang lahat ng mga tagapagpahiwatig at resulta na nakuha ay dapat na matukoy ng isang kwalipikadong espesyalista.

4.5 4.50 sa 5 (6 na Boto)

Nilalaman

Upang masuri ang kakayahan ng katawan na labanan ang mga nakakahawang sakit o upang matukoy ang yugto ng patolohiya, ginagamit ang isang pagsusuri sa dugo. Ang pamamaraan ng ELISA ay sumasakop sa isang mahalagang lugar sa mga pagsubok sa laboratoryo; nakakatulong ito upang komprehensibong pag-aralan ang aktibidad ng proteksiyon na function ng dugo at matukoy ang immunodeficiency sa Nakakahawang sakit, mga sakit sa dugo, hormonal, mga proseso ng autoimmune.

Ano ang enzyme immunoassay blood test?

Ang pamamaraang ito ay tumutukoy sa pananaliksik sa laboratoryo na tumutukoy sa pagkakaroon ng proteksiyon na mga kadahilanan ng dugo ng isang likas na protina (antibodies) sa ilang mga pathogenic na ahente (antigens). Ang isang enzyme-linked immunosorbent test ay nakakakita ng mga immunoglobulin, na makikita sa anyo ng mga immunocomplex. Lumilitaw ang mga ito kapag nangyari ang mga kumplikadong neurohumoral na reaksyon ng immune defense ng tao, na nagiging tugon sa pagpapakilala ng mga dayuhang antigens.

Ang katawan ay gumagawa ng mga tiyak na antibodies laban sa bawat uri ng pathogen. Susunod, ang pathological microorganism o antigen ay nagbubuklod at isang kumplikadong "antigen-antibody" na tambalan ay nabuo. Pagkatapos ito ay neutralisado, nangyayari ang enzymatic lysis, nangyayari ang isang reaksyon ng phagocytosis, at ang proseso ay nagtatapos sa pag-alis mula sa katawan. Ang pagkakaroon ng mga partikular na complex, na tinutukoy ng ELISA, ay nagpapahiwatig ng uri ng pathogen o nakakapinsalang sangkap sa pasyente.

Mga klase ng immunoglobulin

Natuklasan at pinag-aralan ng mga siyentipiko ang 5 uri ng immunoglobulin: IgE, IgD, IgG, IgM, IgA. Mayroong iba pang mga klase, ngunit sila ay nasa yugto pa rin ng pananaliksik, at ang kanilang tungkulin ay hindi lubos na nauunawaan. Sa praktikal na gamot, mahalaga ang A, M, G. Ang nilalaman ng impormasyon at katumpakan ng pagpapasiya ay batay sa mga agwat ng oras kung kailan sila lumilitaw, umabot sa pinakamataas at nawawala.

Mga indikasyon para sa pagsusuri ng dugo gamit ang ELISA

Gamit ang pagsusuri na ito, maaari mong suriin ang pagiging epektibo ng paggamot, magsagawa ng isang komprehensibong pag-aaral bago ang mga operasyon ng transplant, matukoy ang estado ng immunodeficiency at antibodies sa higit sa 600 mga uri ng allergens. Ang pagsusuri ng dugo gamit ang pamamaraang ELISA ay ginagamit bilang karagdagang pamamaraan pagtuklas ng mga selula ng kanser. Ang isang pagsusuri ay inireseta kung kinakailangan upang makita ang mga antibodies sa mga mikrobyo na pumukaw sa mga pathology na nakukuha sa sekswal:

• trichomoniasis;
• syphilis;
• toxoplasmosis;
• mycoplasmosis;
• ureaplasmosis.

Sa kaso ng helminthic infestations, ang pagsusuri sa ELISA ay magsasaad ng pagtaas sa dami ng immunoglobulins. Ang mga pag-aaral ay isinasagawa upang kumpirmahin kung ang pasyente ay may:

• Epstein Barr virus;
• impeksyon sa herpetic;
• cytomegalovirus;
• grupo ng viral hepatitis.

Pagsusuri ng dugo gamit ang ELISA method

Ang pagsusuri sa dugo ng enzyme immunoassay ay hindi lamang ang opsyon para sa pagtukoy ng mga immunoglobulin. Minsan may ginagawang bakod para sa pag-aaral na ito cerebrospinal fluid, mga tela vitreous, amniotic fluid. Kapag gumagamit ng dugo, ito ay kinokolekta mula sa ulnar na ugat gamit ang isang injection needle. Ang pagsusulit ay dapat gawin sa isang walang laman na tiyan; hindi inirerekomenda na kunin ito bago ang ELISA. mga kagamitang medikal, na maaaring makaapekto sa resulta. Dapat mong iwanan ang alkohol, paninigarilyo, at paggamit ng droga bago mag-donate ng biomaterial. Mga pagpipilian sa resulta ng pagsubok:

1. Kung negatibo ang immunoglobulins IgG, IgM, IgA, sinasabi ng mga doktor na walang patolohiya o paunang yugto. Ang parehong resulta (negatibo) ay pagkatapos ng kumpletong pagbawi pagkatapos ng mahabang panahon.
2. Kung ang IgG ay positibo, ngunit ang IgM at IgA ay hindi nakita, ito ay nagpapahiwatig ng pagbuo ng kaligtasan sa sakit pagkatapos ng pagbabakuna o isang nakakahawang sakit.
3. Sa mataas na titer ng IgM at negatibong IgA, IgG, isang diagnosis ng isang talamak na nakakahawang sakit ay ginawa.
4. Kung positibo ang IgG, IgM, IgA, pinag-uusapan ng mga doktor ang talamak na yugto ng pagbabalik ng dati nang malalang sakit.
5. Para sa isang talamak na impeksiyon na nasa yugto ng paghina (remission), ang ELISA test ay nagpapakita ng mga negatibong titer ng IgM, habang ang IgA at IgG ay magiging positibo.

Mga kalamangan at kawalan ng pagsusuri sa ELISA

Ang pangunahing negatibong aspeto ng pag-aaral na ito ay ang posibilidad na makakuha ng maling positibo o maling negatibong resulta. Ang dahilan ng hindi pagiging maaasahan ay ang paggamit ng mga gamot at mga teknikal na depekto sa laboratoryo. Ang proseso ng mga metabolic disorder sa katawan ay maaaring pekein ang pagsusuri. Ang pangunahing bentahe ng pagsusuri ng ELISA ay:

• katumpakan, pagtitiyak ng diagnostic;
• mababang halaga ng pagsusuri;
• bilis ng pagkuha ng mga resulta;
• ang posibilidad ng dynamic na pagsubaybay sa yugto ng patolohiya at ang pagiging epektibo ng paggamot;
• kadalian ng pananaliksik;
• ang kakayahang magsagawa ng mass examinations ng foci ng impeksiyon;
• kawalan ng sakit, kaligtasan para sa pasyente;
• aplikasyon sa pagproseso ng teknolohiya ng impormasyon.

Video

May nakitang error sa text?
Piliin ito, pindutin ang Ctrl + Enter at aayusin namin ang lahat!

Salamat sa pag-unlad ng modernong gamot, hindi na kailangang umasa ang doktor hindi direktang pagpapakita sakit o magsagawa ng maraming yugto pananaliksik sa laboratoryo. Ito ay sapat na upang magsagawa ng isang pagsusuri na kumpirmahin o pabulaanan ang sinasabing paunang pagsusuri.

Ang pamamaraang ito ay enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) - binibigyang-daan ka ng pag-aaral na ito na makakita ng mga partikular na antibodies at antigens na katangian ng iba't ibang mga pathologies, na lubos na nagpapabilis sa pagsusuri.

Ang pagsusuri sa ELISA ay isang pagsubok sa laboratoryo (paraan) na tumutulong na matukoy ang presensya o kawalan ng ilang antibodies sa katawan upang labanan ang virus at ang dami ng mga ito.

Ang batayan ng pag-aaral ay ang natural na reaksyon ng antigen (isang bagay na nakakapinsala sa katawan) - antibody (isang protina na sumisira sa mga nakakapinsalang bagay), na ginagawang posible upang makita ang pagkakaroon ng iba't ibang mga virus at bakterya.

Ang ELISA ay isang natural na immune response ng katawan - ang interaksyon ng isang antibody na may kaukulang antigen. Kaya, sa panahon ng ELISA, ang mga antigen o antibodies ay idinagdag nang paisa-isa sa isang test tube na may materyal, pagkatapos nito ay natutukoy ang konsentrasyon ng mga nagresultang antigen-antibody complex.

Kung ang mga tugma ay nabuo, pagkatapos ay lumitaw ang mga immune complex, kung gayon ang isang enzymatic na reaksyon ng pangulay na may pinagsamang molekula ay nangyayari. Ito ay salamat sa pagbabago ng kulay sa panahon ng enzymatic na indikasyon na ang sakit ay nakilala pagkatapos suriin ang antas ng tinutukoy na tambalan.

Mga uri ng immunoglobulin

Ang mga immunoglobulin ng tao ay naiba sa ilang mga klase na naiiba sa bawat isa sa mga katangian, istraktura at antigenic na katangian ng mabibigat na kadena (H chain). Ang lahat ng mga mammal, kabilang ang mga tao, ay may limang H-chain, na tumutukoy sa pag-aari ng mga immunoglobulin sa kaukulang klase: G, M, A, D, E.

Ang bawat klase ay naiiba sa bawat isa sa mga biological na katangian, at ang kakayahang magbigkis ng mga antigen, at ang bilis at lakas ng koneksyon sa molekula.

Ang mga function ng bawat immunoglobulin (Ig) ay magkakaiba:

	Ang dami sa katawan	Mga pag-andar	Half-life (araw)	Ibig sabihin
G	70%	Form passive immunity sa isang bagong panganak; kinakailangan para sa immune response mapabuti ang phagocytosis,	21-24	magbigay ng pangmatagalan humoral na kaligtasan sa sakit para sa mga nakakahawang sakit
M	5-10%	kinakailangan upang maisaaktibo ang phagocytosis, may kakayahang magbigkis ng 5 molekula ng antigen,	5	Nagbibigay ng pangunahing tugon sa immune
A	10-15	Neutralize ng mga lason at mga virus kinakailangan para sa pagbuo ng maagang kaligtasan sa sakit Ang paglitaw ng mga immunoglobulin ay nangyayari kasama ang isang kakaibang "kadena" - lgM lgG, ganito ang reaksyon ng katawan sa hitsura ng isang antigen sa katawan. Sa panahon ng mga diagnostic sa laboratoryo, ang konsentrasyon ng tatlong pangunahing immunoglobulin ay nasuri - G, M, A. Mga indikasyon para sa pagsusuri sa immunoglobulin Ang pagsusuri sa ELISA ay nagiging mas at mas popular bawat taon. Ang ganitong pag-aaral ay nagpapabilis sa pagsusuri, at ito ay napakahalaga para sa paggamot ng mga pathologies tulad ng: viral hepatitis; impeksyon sa HIV; cytomegalovirus, Epstein Barr virus, herpes virus, rubella, tuberkulosis, salmonellosis, dysentery, tick-borne encephalitis, Helicobacter bacteria, borreliosis, tetano, syphilis, dipterya, leptospirosis, chlamydia, ureaplasmosis, mycoplasmosis, mahalak na ubo. mga flatworm mga bulate histolic amoebae, panginginig sa atay, Giardia, toxoplasma, trichinella, walang kabuluhan, cestodoses. Ang ELISA ay isang natatanging marker ng mga autoimmune pathologies at malignant neoplasms. Paghahanda para sa pagsusulit Kapag naghahanda para sa pag-aaral, dapat mong sundin ang mga sumusunod na alituntunin: Inirerekomenda din ng mga doktor ang pagsunod sa isang espesyal na diyeta - pag-aalis ng mataba at Pritong pagkain, at kung ang pag-aaral ay isinasagawa para sa hepatitis, pagkatapos ay kinakailangan na huwag ubusin ang anumang mga orange na gulay at lalo na ang mga bunga ng sitrus. Dapat kang mag-donate ng dugo sa umaga nang walang laman ang tiyan. Ang maling-positibong pagsusuri ay nangyayari dahil sa hindi natutupad na mga rekomendasyon, lalo na ang pagkonsumo ng matatabang pagkain, na humahantong sa masyadong mataas na konsentrasyon ng triglycerides sa plasma, na nagiging sanhi ng pagbaba ng ELISA conductivity. Sample na pamamaraan ng pagkolekta Maaaring gamitin ang whole blood, serum o venous blood plasma bilang test material. Ang materyal ay kinokolekta, kadalasan mula sa ulnar vein, gamit ang isang disposable needle at isang vacuum tube; 5-10 ml ng dugo ay kinakailangan. Upang matiyak ang katumpakan ng resulta, mahalaga na sumunod sa tamang pamamaraan ng sampling - ang pagbutas ng sisidlan mismo at ang mga nakapaligid na tisyu ay dapat isagawa sa isang pagmamanipula, samakatuwid ang isang maikling karayom ​​na may malaking diameter ay ginagamit, upang ang ang tapat ng dingding ng ugat ay hindi nasaktan at ang mga pulang selula ng dugo ay hindi napinsala. Gayundin, upang mapanatili ang integridad ng mga pulang selula ng dugo, kinakailangan para sa dugo na dumaloy pababa sa mga dingding ng test tube. Sa panahon ng pag-iimbak ng materyal, dapat na iwasan ang posibleng ionization; bilang karagdagan, ang materyal ay hindi dapat makipag-ugnay sa mga natitirang disinfectant, samakatuwid isang disposable plastic tube lamang ang ginagamit, na minarkahan ng pangalan ng pasyente, petsa at oras ng paghahatid ng materyal. Kung kinakailangan ang panandaliang pag-iimbak ng materyal sa pagsubok, kung gayon ang isang silid ng pagpapalamig na may temperatura na 2-4 o C ay ginagamit, kung kinakailangan ang mas mahabang imbakan, kung gayon ang materyal ay nagyelo sa temperatura na -20 o C. Paano ginagawa ang pagsusuri Matapos ihanda ang materyal na pinag-aaralan, sinisimulan ng katulong sa laboratoryo ang mga kinakailangang manipulasyon. Para sa layuning ito, ang isang bilang ng mga espesyal na hanay ng mga antigens ay ginagamit, na may kakayahang pukawin ang tugon ng katawan sa isang nagpapawalang-bisa, ito ay iba't ibang mga impeksiyon, mga hormone, at mga allergens. Ang inaasahang reaksyon ng antigen-antibody ay ganito ang hitsura: Ang pangunahing reaksyon ay isang nakitang Ig (Ab) at isang purified pathogen antigen (Ag). Upang makita ang mga nagresultang immune complex, isang bagong immunological reaction ang sumusunod, kung saan ang antigen ay isang bound specific Ig, at ang antibody para dito ay isang conjugate Ig (Ab). Ang huling yugto ay isang reaksyong enzymatic, kasama ang isang molekula ng katalista ng conjugate. Ang substrate ay isang chromogen (hindi kulay), na nagiging kulay sa panahon ng reaksyon, at ang intensity ng kulay ay tinutukoy ng quantitative indicator ng immunoglobulin sa sample. Sa ngayon, maraming iba't ibang mga opsyon sa ELISA ang nabuo, ngunit walang malinaw na pag-uuri ng mga ito. Karaniwan, ang mga pamamaraan ay isinasaalang-alang batay sa kanilang paghahati sa hetero- at homogenous - lahat ng mga yugto ng pagsusuri ay nangyayari gamit ang isang solidong yugto o gumagamit lamang ng isang solusyon. Ang mga modernong klinikal na diagnostic laboratories ay karaniwang gumagamit ng heterogenous (solid-phase) ELISA, kung saan ang solid phase ay nangangahulugang ang pagsipsip ng mga antigens o antibodies sa solid na ibabaw ng mga espesyal na balon na matatagpuan sa isang polystyrene microplate; ang pamamaraan ay nahahati sa direkta at hindi direktang ELISA. Sa pamamagitan ng direktang ELISA, ang ipinakilala na antigen ay naayos sa panahon ng proseso ng pagpapapisa ng itlog sa ibabaw ng mga walang laman na balon; para dito, ang materyal ng pagsubok ay inilalagay sa malinis na mga balon sa loob ng 20-25 minuto, ito ay kinakailangan para sa antigen na ikabit sa kanilang ibabaw. Pagkatapos nito, idinagdag ang kinakailangang antibody. Susunod, ang materyal ay nananatili para sa isang tiyak na oras upang bumuo ng mga bono. Ang mga antibodies ay palaging idinagdag nang labis, kaya kahit na naroroon ang mga ito, ang mga hindi nakatali na antigen ay nananatili sa sample, at kung walang mga antigen, kung gayon ay walang mga koneksyon. Upang alisin ang mga "dagdag" na antibodies, ang decantation ay isinasagawa, pagkatapos ay ang mga antibodies lamang na lumikha ng isang bono sa antigen ay nananatili. Sinusundan ito ng isang reaksyon ng enzymatic - pagdaragdag ng isang solusyon na may isang enzyme sa mga balon, pagkatapos kung saan ang mga nagresultang mga bono ay may kulay. Sa hindi direktang pamamaraan Gumamit ang ELISA ng mga antibodies, na paunang pinagsama sa substrate ng reaksyon ng enzymatic; sa kasong ito, ang koneksyon ng mga antibodies sa antigen ay nangyayari sa panahon ng proseso ng pagpapapisa ng itlog, pagkatapos kung saan ang pagpapakilos ng mga bono sa ibabaw ng mga balon ay nangyayari, at ang conjugate at substrate-chromogenic reagent ay idinagdag pagkatapos ay kulayan ang reaksyon. Kaya, ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng hindi direkta at direktang pamamaraan ay hindi pagdirikit ng materyal sa ibabaw ng malinis na mga balon, ngunit nagbubuklod sa antigen na hindi kumikilos sa plato. Ang reaksyon ay huminto gamit ang mga dalubhasang aparato, pagkatapos ang bawat balon ay sumasailalim sa isang proseso ng photometric, na sinusundan ng Mga katangian ng paghahambing ang resulta na nakuha sa mga naunang isinagawang control test. Kung ang isang pagtaas sa optical density ay napansin sa sample, kung gayon ang konsentrasyon ng mga tiyak na antibodies sa resulta ng pagsubok ay na-overestimated din. Kailan magiging handa ang pagsusuri? Ang pag-aaral ay hindi tumatagal ng maraming oras; mula sa pag-sample ng dugo hanggang sa pagtanggap ng resulta, ito ay tumatagal mula 1 hanggang 10 araw, depende sa mga diagnostic measure. Mga resulta ng pagsusulit at ang kanilang interpretasyon Ang form ng resulta ng diagnostic na natanggap ng pasyente ay nagpapahiwatig ng isang negatibo o positibong resulta para sa ilang mga klase ng immunoglobulins, at isang quantitative indicator ng iba't ibang klase ng antibodies ay ipinahiwatig din. Posible ang iba't ibang interpretasyon ng mga resulta: IgM (+) (IgA, IgG ay hindi natukoy) - proseso ng pagpapagaling; IgM (-);IgG (+), IgA (+) - talamak na nakakahawang patolohiya; IgM, IgG, IgA (lahat ay may - kahulugan) - wala mga mekanismo ng pagtatanggol sa mga impeksyon; IgG (+/-) at IgA (+/-), IgM (+) – talamak na proseso; IgM (-), IgA (-), IgG (+) – post-infectious immunity; IgM, IgG, IgA (+) - talamak na patolohiya sa talamak na yugto. Kaya, halimbawa, kung ang IgG at IgM ay nakita, kung gayon ang pasyente ay maaaring magkaroon ng isa sa mga sumusunod na sakit: viral hepatitis; cytomegalovirus; buni; bulutong; chlamydia; impeksyon ng staphylococcal o streptococcal. Ang enzyme immunoassay ay madalas na inireseta para sa hormonal studies; ang mga pamantayan ay ipinapakita sa talahanayan: Pangalan ng hormone Sahig Norm 1 thyroglobulin m/f Hanggang sa 70 IU/ml 2 thyroxine m/f 64-146 nmol/l 3 triiodothyronine m/f 1.8-2.8 nmol/l 4 Libreng thyroxine m/f 11-25 pmol/l 5 Libreng triiodritonin m/f 4.49-9.3 pmol/l 6 Testosteron, dehydrotestosterone AT 0.5-10 mU/l Ang pagsusuri sa ELISA ay isang diagnostic test na nagbibigay-daan sa iyo upang masuri ang posibilidad ng pagbuo ng mga oncological pathologies. Gayunpaman, ang interpretasyon ng mga resulta ay isinasagawa lamang ng dumadating na manggagamot. Kahulugan ng mga resulta ng pagsubok Ang ELISA ay angkop para sa pag-detect ng iba't ibang anyo ng mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik, kabilang ang syphilis, at kadalasang ginagamit para sa pagsusuri sa mga buntis na kababaihan. Salamat sa pag-aaral na ito, maaari mong malaman kung gaano katagal naganap ang impeksyon at ang yugto ng sakit sa oras ng pag-aaral: Ang immunoglobulins M ay nagpapahiwatig ng tagal ng sakit; IgA - ang pasyente ay nahawaan ng higit sa 30 araw na nakalipas; Nakikita ang IgG sa "tugatog" ng mga sakit, o sa sandaling natapos ang therapy. Sa proseso ng pagsusuri sa isang balon sa isang plato na may negatibong tagapagpahiwatig mananatiling walang kulay, at ang mga positibo ay nagiging maliwanag na dilaw. Kung ang kulay ng mga positibong balon ay hindi tumutugma sa kulay ng kontrol, kung gayon ang resulta ay maituturing na kaduda-dudang at kailangan ang isang paulit-ulit na pagsubok. Ang enzyme immunoassay ay ang unang hakbang sa pag-diagnose ng HIV. Ang pagsusuri ay hindi maaaring isagawa kaagad pagkatapos ng pinaghihinalaang impeksyon; dapat itong maghintay hanggang sa katapusan tagal ng incubation(mula 14 araw hanggang 6 na buwan). Sa panahon ng pagsusuri, tinutukoy ang mga antibodies sa HIV-1 at HIV-2, hinahanap ang mga antibodies ng klase G, na kadalasang lumilitaw sa mas huling yugto, at ang mga antibodies ng klase A at M ay natutukoy sa mga unang yugto (sa panahon ng pagpapapisa ng itlog). kung ang unang pagsusuri ay nagbibigay ng isang positibong resulta, ang dugo ay muling susuriin ng isa pang laboratoryo technician; ang paulit-ulit na positibong resulta ay nagsasaad ng muling pagkuha ng materyal, Kung ang resulta ay paulit-ulit, ang pasyente ay inireseta ng immunoblotting. Ang huling konklusyon tungkol sa pagkakaroon ng impeksyon sa HIV ay ibinibigay lamang pagkatapos ng resulta ng immunoblotting. Ginagamit din ang ELISA bilang diagnostic na pag-aaral tuberculosis, ngunit kahit na ang pasyente ay may mga antibodies sa patolohiya na ito, hindi ito palaging kumpirmahin ang pagkakaroon ng tuberculosis, samakatuwid ang ELISA ay kadalasang ginagamit bilang isang pamamaraan ng paglilinaw, o upang masuri ang isang nakatagong extrapulmonary form. IgG- talamak na yugto mga infestation
IgA – naganap ang impeksyon mahigit 30 araw na ang nakalipas
	IgG - ang pagsalakay ay nasa talamak na yugto
IgG – kinukumpirma ang diagnosis at ipinapakita ang pagiging epektibo ng therapy

Mga kalamangan at kahinaan ng pagsusuri

Ang ELISA ay may maraming mga pakinabang, na nagpapaliwanag ng katanyagan nito sa mga doktor at pasyente, ito ay:

• mataas na katumpakan ng mga resulta,
• abot-kayang presyo,
• mabilis na resulta,
• pagkilala sa yugto ng sakit,
• pagkontrol ng sakit sa paglipas ng panahon.

Gayunpaman, kasama ang mga pakinabang, mayroon ding kawalan - sa mga bihirang kaso Ang pagsusuri ay maaaring maling positibo o maling negatibo.

Bakit maaaring hindi mapagkakatiwalaan ang resulta

Ang mga error bilang resulta ay maaaring lumitaw dahil sa mga teknikal na paglabag, pati na rin hindi mapagkakatiwalaang pagsusuri nangyayari sa mga taong may ilang malalang sakit ( rheumatoid factor) na nailalarawan sa pamamagitan ng paggawa ng mga tiyak na antibodies.

Ang huling resulta ay naiimpluwensyahan din ng paggamit ng pasyente ng mga gamot at metabolic disorder. Para sa mga kadahilanang ito, ang isang positibong resulta para sa HIV at oncopathology ay nangangailangan ng mga paulit-ulit na sample.

Gastos ng pag-aaral

Ang presyo ng ELISA ay nag-iiba depende sa direksyon ng diagnosis (RUB):

• hepatitis 250 -900;
• mga virus – 250 -1000;
• HIV – 250-350;
• helminthic infestations – 280 – 900;
• syphilis -150-250;
• impeksyon sa fungal 400-500.

Format ng artikulo: Lozinsky Oleg

Video tungkol sa pagsusuri sa ELISA

Paano isinasagawa ang pagsusuri sa ELISA: