Кафедра клинической лабораторной диагностики с курсом ФПК и ПК

Перечень разделов по дисциплине клиническая лабораторная диагностика для подготовки к выполнению аудиторных контрольных работ в зимнюю лабораторно-экзаменационную сессию студентами 6 курса заочной формы обучения.

1. Организационная структура клинико-диагностической лаборатории.

2. Общеклинические лабораторные исследования.

3. Гематологические лабораторные исследования.

4. Лабораторные методы оценки гемостаза.

5. Биохимические лабораторные исследования.

6. Контроль качества лабораторных исследований.

Перечень контрольных вопросов по дисциплине клиническая лабораторная диагностика для подготовки к выполнению аудиторных контрольных работ в зимнюю лабораторно-экзаменационную сессию студентами 6 курса заочной формы обучения.

Структурная организация клинико-диагностической лаборатории.

Нормативные документы и приказы МЗ РБ, регламентирующие работу клинико-диагностической лаборатории.

Оборудование клинико-диагностической лаборатории.

Основная измерительная и аналитическая аппаратура клинико-диагностической лаборатории.

Основы техники безопасности и правила санэпидрежима при работе в клинико-диагностической лаборатории.

Правила взятия, доставки, приема, оформления и регистрации биологического материала.

Общеклинические лабораторные исследования.

Подготовка пациента к исследованию, сбор, хранение и обработка материала для общего анализа мочи.

Физические свойства мочи: цвет, прозрачность, запах, рН, относительная плотность мочи.

Химические свойства мочи, методы определения общего белка (качественный и количественный методы, методы «сухой химии»).

Определение глюкозы в моче при помощи индикаторной бумаги и глюкозооксидазным методом.

Правила приготовления нативного препарата мочевого осадка.

Количественное определение элементов организованного осадка мочи.

Определение элементов неорганизованного осадка.

Виды неорганизованных осадков.

Общий клинический анализ крови.

Характеристика методов определения СОЭ, концентрации гемоглобина, подсчета количества эритроцитов, цветового показателя, лейкоцитов и лейкоцитарной формулы.

Правила подготовки пациента, забор, хранение и обработка материала для общего клинического анализа крови.

Нормальные значения и пределы физиологических колебаний уровня эритроцитов и лейкоцитов периферической крови.

Правила приготовления препарата и подсчета в камере Горяева.

Метод определения гемоглобина крови гемоглобинцианидным методом.

Современное представление о костно-мозговом кроветворении.

Процентное содержание лейкоцитов в периферической крови. Диагностическое значение лейкоцитарной формулы.

Лабораторные исследования, характеризующие свертывающую систему крови.

Понятие о системе свертывания крови.

Первичный гемостаз. Лабораторные методы исследования первичного гемостаза.

Фазы коагуляционного гемостаза.

Фибринолиз.

Антикоагулянтная система.

Лабораторные методы оценки вторичного гемостаза.

Лабораторные исследования, характеризующие биохимические показатели крови.

Лабораторные показатели, характеризующие белковый обмен. Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом.

Остаточный азот и его компоненты. Методы определения мочевины, креатинина, мочевой кислоты.

Методы исследования ферментов. Клинико-диагностическое значение определения активности ферментов.

Биологическая роль углеводов. Определение содержания глюкозы ферментативным методом.

Липопротеины плазмы крови. Лабораторные показатели липидного обмена.

Образование и метаболизм желчных пигментов. Клинико-диагностическое значение исследования показателей пигментного обмена.

Аналитическая надежность и контроль качества клинических лабораторных исследований.

Аналитическая оценка лабораторных результатов. Виды ошибок, их характеристика.

Внутрилабораторный контроль качества. Методы контроля воспроизводимости результатов исследования. Контроль правильности результатов исследования.

C оставление аналитического лабораторного заключения.

Аналитическое лабораторное заключение составляется по условиям ситуационной задачи.

На основании их анализа предложенных лабораторных данных необходимо ответить на следующие вопросы:

Принцип, лежащий в основе анализируемого метода;

Необходимое оборудование;

Правила подготовки исследуемого материала и основные источники ошибок возможных при выполнении данного метода;

Единицы измерения;

Понятие о референтных значениях. Клинико-диагностическое значение анализируемого метода.

Практические навыки:

Организация рабочего места для выполнения лабораторных исследований;

Приготовление реагентов в необходимой концентрации;

Прием, маркировка и хранение биологического материала;

Выполнение общего анализа крови;

Выполнение общего анализа мочи;

Выполнение гемостазиологического исследования;

Выполнение биохимических исследований;

Оформение результатов лабораторных исследований;

Оптимальное время исследования крови – в интервале от 1 до 4 часов после взятия.В промежутке от 5 до 30 минут происходит временная адаптации тромбоцитов к антикоагулянту и их агрегация, что может привести к их ложному снижению в пробе крови.

Нежелательно исследовать кровь позднее 8 часов после взятия, т.к. изменяются некоторые характеристики клеток: снижается объем лейкоцитов, повышается объем эритроцитов, что в конечном итоге приводит к ошибочным результатам измерения и неправильной интерпретации результатов. Только концентрация гемоглобина и количество тромбоцитов остаются стабильными в течение суток хранения крови.

Кровь нельзя замораживать. Капиллярную кровь с К 2 ЭДТА следует хранить при комнатной температуре и анализировать в течение 4 часов после взятия.

Для обеспечения качественного результата исследований нужно четко контролировать время и условия хранения проб до выполнения анализа.

При необходимости проведения отсроченного анализа (транспортировка на отдаленные расстояния, техническая неполадка прибора и т. д.), пробы крови хранят в холодильнике (4 о – 8 о С) и исследуют в течение 24 часов. Однако при этом следует учитывать, что происходит набухание клеток и изменение параметров, связанных с их объемом. У практически здоровых людей эти изменения не носят критического характера и не сказываются на количественных параметрах, но при наличии патологических клеток, последние могут изменяться или даже разрушаться в течение нескольких часов с момента взятия крови.

Непосредственно перед исследованием кровь должна быть тщательно перемешана в течение нескольких минут для разведения антикоагулянта и равномерного распределения форменных элементов в плазме. Длительное постоянное перемешивание образцов до момента их исследований не рекомендуется вследствие возможного травмирования и распада патологических клеток.

Исследование крови на автоматическом анализаторе проводится при комнатной температуре. Кровь, хранившуюся в холодильнике, необходимо вначале согреть до комнатной температуры, так как при низкой температуре увеличивается вязкость крови, и форменные элементы имеют тенденцию к склеиванию, что в свою очередь, приводит к нарушению перемешивания и неполному лизису. Исследование холодной крови может быть причиной появления «сигналов тревоги» вследствие компрессии лейкоцитарной гистограммы.

При выполнении гематологических исследований на значительном удалении от места взятия крови неизбежно возникают проблемы, связанные с неблагоприятными условиями транспортировки. Воздействие механических факторов (тряска, вибрация, перемешивание и т.д.), температурного режима, вероятность пролива и загрязнения проб могут оказывать влияние на качество анализов. Для устранения этих причин при перевозках пробирок с кровью рекомендуется использовать герметично закрытые пластиковые пробирки и специальные транспортные изотермические контейнеры. Во время транспортировки не допускается контакт образца (с нативным материалом) и бланка-направления, в соответствии с правилами биологической безопасности.

^ 4.3. Прием и регистрация биологического материала

Пробирки с образцами венозной крови доставляют в лабораторию в день взятия в в штативах в специальных сумках-саквояжах для доставки биологического материала, в которых пробирки должны находиться в вертикальном положении, а при транспортировке на удаленное расстояние - в специальных контейнерах.

Сотрудник лаборатории, принимающий материал, должен проверить:

Правильность оформления направления: в бланке–направлении указываются данные обследуемого (фамилия, имя и отчество, возраст, № истории болезни или амбулаторной карты, отделение, диагноз, проведенная терапия);

Маркировку пробирок с образцами крови (на них должны быть нанесены код или фамилия больного, идентичные коду и фамилии в бланке направления материала для исследования). Лаборант должензарегистрировать доставленный материал, отметить количество пробирок.

^ 4.4 Подсчет клеточного состава крови на гематологическом анализаторе

Подсчет клеточного состава крови на гематологическом анализаторе должен проводиться в строгом соответствии с инструкцией к прибору.

При работе на гематологическом анализаторе следует:

Использовать кровь, стабилизированную К- 2 ЭДТА в рекомендованной пропорции для конкретной соли и одноразовые пробирки для гематологических исследований (простых или вакуумных);

Перед анализом осторожно, но тщательно перемешать пробирку с кровью (рекомендуется для этой цели использовать устройство для перемешивания образцов крови - ротомикс);

Использовать реактивы, зарегистрированные в установленном порядке; при смене реактивов на продукцию другого производителя следует проверить и установить калибровку прибора;

Запускать прибор, соблюдая все стадии промывки, добиваясь нулевых (фоновых) значений показателей по всем каналам;

Обращать внимание на сообщения прибора о вероятных систематических ошибках: помнить, что увеличение МСНС выше нормальных значений, как правило, результат ошибки измерения;

При выявлении ошибки обязательно устранить причину, не работать на неисправном приборе;

Выполнять процедуру контроля качества по соответствующей программе. с оценкой полученного результата;

Работать осмысленно, сопоставляя получаемые результаты с клинической характеристикой проб больного;

После окончания измерений тщательно промыть анализатор;

При остановке прибора на длительный срок обязательно выполнить все процедуры консервации (по возможности совместно с сервис-инженером);

При возникновении технических проблем следует воспользоваться помощью сервис-инженера фирмы, имеющей лицензию на техническое обслуживание; не доверять работу необученному персоналу.

Приступая к работе на гематологическом анализаторе, следует учесть границы линейности измерения анализируемых параметров. Оценка проб со значениями анализируемых параметров, превышающих границу линейности измерения, может привести к ошибочным результатам. В большинстве случаев при анализе проб с гиперцитозами анализатор вместо значения измеряемого параметра выдает значок "D" (dilute), что указывает на необходимость разведения пробы и повторного измерения. Разведение необходимо проводить до тех пор, пока не будут получены схожие итоговые результаты при двух ближайших разведениях.

^ П р и м е р ─ Анализ пробы больного с гиперлейкоцитозом на трех различных гематологических анализаторах представлен в таблице.

Таблица 3

¦Результаты подсчета количества при гиперлейкоцитозе, выполненные на трех различных гематологических анализаторах

^ Гематологические анализаторы	Степень разведения пробы				Итоговое значение
	^ Цельная кровь	1:1	1:3	1:4	WBC
1	D	274,5	274,5	143,1	715,5
2	322,6	253,2	177,7	141,8	709,0
3	D	D	168,3	139,1	695,5

Из таблицы видно, что при анализе цельной крови только один анализатор (2-й) дал цифровое значение количества лейкоцитов, два других указали на необходимость разведения пробы. Последующее поэтапное измерение пробы в трех разведениях позволило добиться близких конечных результатов на всех приборах только при разведении 1:3 и 1:4. Таким образом, итоговое количество лейкоцитов составило 700,0 - 710,0 x 10 9 /л, что более чем в 2 раза превышает первоначальное значение, полученное в цельной крови на 2-м анализаторе и в 1,5 - при разведении 1:1 на 1-м и 2-м анализаторах.

1. 
   ^ Калибровка гематологических анализаторов

Под калибровкой понимается процедура настройки анализатора, в результате

Которой достигается равенство нулю систематической составляющей погрешности (нулевое смещение) или подтверждается, что смещение равно нулю с учетом погрешности калибровки. Калибровка гематологических анализаторов может быть выполнена двумя основными способами:

По цельной крови;

По образцам стабилизированной крови с аттестованными значениями.

^ 5.1 Калибровка по цельной крови

Калибровка по цельной крови может быть выполнена путем сравнения с референтным анализатором, калибровка которого верифицирована и может быть принята за исходную.

Для калибровки путем сравнения с референтным анализатором используется 20 образцов венозной крови пациентов, выбранных произвольно из дневной программы исследований лаборатории, располагающей референтным анализатором. Кровь должна быть взята в вакуумные пробирки с антикоагулянтом К 2 ЭДТА. После анализа на референтном анализаторе пробирки с кровью доставляются лабораторию для анализа на калибруемом приборе. Время между измерениями на референтном и калибруемом анализаторе не должно превышать 4 часа. Анализ калибровочных проб на калибруемом приборе должен выполняться таким же способом, как и анализ проб пациентов. Полученные результаты заносятся в таблицу по форме, приведенной в Приложении 1. Данные результаты используются для определения соответствующих калибровочных факторов, которые численно равны коэффициентам наклона калибровочных прямых, проходящих на графике через начало координат.

Калибровочные факторы рассчитываются на компьютере с использованием программы EXCEL, входящей в состав пакета Microsoft OFFICE любой версии. Для расчета калибровочных факторов в данной программе строится точечная диаграмма, где по оси Х откладываются измеренные значения, по оси Y – референтные, задается линия регрессии через начало координат. Программа рисует калибровочную прямую и определяет ее наклон, который и является искомым калибровочным фактором. При выявлении грубых ошибок – точек значительно отстоящих на графике от калибровочной прямой, их необходимо удалить из расчета (стереть всю строку в таблице EXCEL). Полученный калибровочный фактор заносится в таблицу Приложения 1 и используется для ручной корректировки калибровки прибора в соответствие с его инструкцией по эксплуатации.

1. 
   ^ Калибровка по образцам стабилизированной крови с аттестованными значениями

Данный способ калибровки базируется на коммерческих калибровочных и контрольных материалах, представляющих собой искусственную смесь стабилизированных человеческих эритроцитов и фиксированных клеток человека или животных, имитирующих лейкоциты и тромбоциты. Ввиду существенного отличия биологических свойств компонентов данных материалов от натуральной крови аттестованные значения гематологических параметров зависят от конкретного типа анализатора.

Во всех случаях, когда возможно, следует использовать калибраторы, специально предназначенные изготовителем для калибровки конкретного типа анализатора. Погрешности установленных значений в современных гематологических калибраторах в основном соответствуют медицинским требованиям. Однако не для всех типов анализаторов такие калибраторы имеются. Кроме того, ввиду ограниченного срока сохранности (как правило, не более 45 дней) не всегда имеется возможность получать непросроченные образцы.

Контрольные материалы не предназначены изготовителем для целей калибровки: допуски для значений значительно шире, методы аттестации и производственного контроля не такие строгие как для калибраторов. При проведении калибровки, контрольные материалы могут быть использованы лишь как один из источников информации о метрологических свойствах прибора.

Следует, однако, иметь ввиду, что при использовании для целей калибровки как контрольных материалов, так и калибраторов, особенности пробоподготовки и эксплуатации анализаторов оказывают существенное влияние на составляющие систематической погрешности. Данные влияющие факторы не могут быть учтены при калибровке коммерческими материалами. Вследствие этого, во всех случаях, проведенная калибровка должна быть верифицирована путем анализа статистики получаемых результатов в пробах пациентов (эритроцитарные индексы, интервалы нормальных значений).

5.2.1 Периодичность калибровки гематологических анализаторов

Требования к периодичности калибровки обычно содержатся в инструкции по эксплуатации анализатора. Как правило, калибровка требуется после ремонта или в случае выявления значимого дрейфа в процедурах внутрилабораторного контроля качества.

5.2.2 Процедура калибровки

Процедура калибровки выполняется в соответствии с инструкцией по эксплуатации анализатора.

5.2.3 Контроль результата калибровки

Данный контроль заключается в анализе калибровочного образца сразу после выполнения калибровки. Выполненная калибровка принимается, если результаты анализа соответствуют калибровочным значениям с учетом аналитической вариации анализатора.

5.2.4 Верификация калибровки с помощью эритроцитарных индексов

В этом способе проверки и уточнения калибровки используется тот факт, что средние значения эритроцитарных индексов – МСНС, МСН и MCV по пациентам имеют довольно малую вариацию и поэтому могут эффективно использоваться для контроля калибровки и дальнейшего контроля качества. Рекомендуемое число проб для усреднения равняется 20. Для определения среднего значения МСНС могут быть использованы любые пробы пациентов, в то время, как для определения средних МСН и MCV следует исключать пациентов с анемиями.

Многие современные гематологические анализаторы имеют встроенные программы расчета текущих средних, что значительно облегчает обработку данных.

Целевые значения эритроцитарных индексов при усреднении по 20 пробам пациентов в возрасте от 18 до 60 лет независимо от пола приведены в таблице 4.

Таблица 4

Целевые значения эритроцитарных индексов

Если полученные средние значения вышли за контрольный допуск, то это означает, что калибровка MCV или Hgb или RBC нуждается в корректировки.

При выяснении причин неудовлетворительной калибровки по результатам исследования эритроцитарных параметров при использовании коммерческих калибровочных/контрольных материалов следует принимать во внимание следующую оценку надежности аттестованных значений материалов:

Наиболее точным и стабильным во времени параметром является концентрация эритроцитов;

Стабильным параметром является Hgb, но он может зависеть от применяемых реактивов (например, циановые или бесциановые);

Самым нестабильным параметром является MCV. Значение MCV имеет тенденцию к изменению в течение всего срока годности материала в довольно широком интервале значений. При уточнении калибровки по MCV данные, полученные из анализа средних по эритроцитарным индексам, имеют приоритет над аттестованными значениями в образцах стабилизированной крови.

Считая калибровку по RBC правильной, в таблице 5 указаны возможные причины выхода средних значений индексов за контрольный допуск.

Таблица 5

Причины выхода за пределы средних значений эритроцитарных индексов

Эритро-цитарные индексы	Среднее значение индекса	Среднее значение индекса	Среднее значение индекса	Среднее значение индекса
MCHC	Ниже границы	Выше границы	Выше границы	Ниже границы
MCH	В границах допуска	В границах допуска	Выше границы	Ниже границы
MCV	Выше границы	Ниже границы	В границах допуска	В границах допуска
Причина	Завышен MCV	Занижен MCV	Завышен Hgb	Занижен Hgb

Решение о необходимости исследовать ту или иную локализацию (влагалище, уретра, цервикальный канал и др.) для анализа принимает лечащий врач на основании совокупности жалоб пациентки (та) и клинической картины заболевания.Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый клинический материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови (допустимо умеренное присутствие примесей в виде крови и слизи). Неправильное взятие биоматериала может привести к невозможности получения достоверного результата и, вследствие этого, необходимости повторного взятия биоматериала.

Порядок взятия клинического материала в пробирку с транспортной средой:

1. Открыть крышку пробирки.

2. С помощью одноразового стерильного зонда получить отделяемое соответствующего

биотопа (влагалище, уретра, цервикальный канал).

3.Перенести зонд с клиническим материалом в пробирку с транспортной средой объемом 1,5 мл, когда зонд упрется в дно пробирки, дополнительным усилием согнуть тонкую часть зонда до насечки, затем отломить и оставить зонд в пробирке.При необходимости получения клинического материала из нескольких биотопов повторить процедуру, каждый раз забирая клинический материал новым зондом в новую пробирку.

3. Пробирку плотно закрыть крышкой, промаркировать.

Особенности взятия клинического материала цервикального канала:

1.Клинический материал цервикального канала получают после введения во влагалище гинекологического зеркала с помощью уретрального зонда или цервикальной цитощетки (для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток!).

2.Перед взятием клинического материала необходимо тщательно обработать отверстие цервикального канала с помощью стерильного марлевого тампона и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором.

3.После введения уретрального зонда в шеечный канал на 1,5 см его вращают несколько раз (2-3 полных оборота по часовой стрелке) и извлекают. При извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.

4. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой (см. выше).

Особенности взятия клинического материала из влагалища:

В день обследования женщины не должны проводить туалет половых органов и спринцевание влагалища.

1. Клинический материал из влагалища получают с заднего или боковых сводов с помощью вагинального или уретрального зонда путем соскоба с поверхности эпителия.

2. Клинический материал должен быть получен ДО проведения мануального исследования.

3. Перед манипуляцией гинекологическое зеркало можно смочить теплой водой, применение антисептиков для обработки зеркала противопоказано.

4. У девочек (virgo) клинический материал получают со слизистой оболочки преддверия влагалища без использования гинекологического зеркала.

5. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой (см. выше).

Особенности взятия клинического материала из уретры у женщин:

1. Клинический материал из уретры получают с помощью уретрального зонда.

2.Перед взятием клинического материала пациентке рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.

3. При наличии свободных уретральных выделений наружное отверстие уретры следует очистить с помощью ватного тампона.

4. При отсутствии свободных выделений может быть проведен легкий массаж уретры.

5. После введения инструмента в уретру на глубину 1 см необходимо продвигать его к наружному отверстию, слегка нажимая на заднюю и боковые стенки уретры (вращательные движения болезненны).

6. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой(см. выше).

Для исследования материала,полученного из нескольких биотопов, процедуру повторяют, каждый раз используя новый стерильный зонд и новую пробирку!!!

Недопустимо смешивать материал из цервикального канала, влагалищного содержимого и уретры в одной пробирке!

Особенности взятия клинического материала из уретры у мужчин:

1,5–2 часов. Для исключения искажений результатов определения состава микрофлоры урогенитального тракта мужчин из-за присутствия в урогенитальном тракте транзиторной микрофлоры в течение трёх дней перед взятием биоматериала рекомендуется половое воздержание или использование защищенного полового контакта.

1.Перед взятием соскоба из уретры обрабатывают головку полового члена в области наружного отверстия уретры тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором.

2.Производят массаж уретры. При наличии свободно стекающих из уретры выделений удаляют их сухим тампоном.

3.Вводят зонд в уретру на глубину 1-2 см. Несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют. Отделяемое забирают в достаточном количестве. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде слизи, крови и гноя.

Взятия клинического материала с крайней плоти головки полового члена (ГПЧ):

Перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение

1,5–2 часов.

1.С помощью одноразового зонда делают соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (крайняя плоть головки полового члена, препуциальный мешок) и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют.

Условия хранения и транспортировки биоматериала:

1. Пробирки с полученным клиническим материалом должны быть промаркированы.

2. В сопроводительном документе-направлении необходимо указать: ФИО, возраст пациентки (та), клинический материал, предполагаемый диагноз, показания к обследованию, дату и время взятия пробы, наименование учреждения (подразделения), направляющего клинический материал.

3. Если время транспортировки клинического материала от момента взятия до момента его доставки в лабораторию не более суток, то пробирку с клиническим материалом необходимо хранить и доставлять в лабораторию при температуре бытового холодильника (+ 4+10°С), не замораживая.

4. В случае невозможности доставки клинического образца в лабораторию в течение суток, допускается однократное замораживание и хранение образца клинического материала при температуре -20°С до одного месяца.

Действующий

МУ 4.2.2039-05

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические
лаборатории

Дата введения 2006-07-01

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-гигиеническому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 6 октября 2005 г. (протокол N 3).

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 23 декабря 2005 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1. Область применения

1.1. В методических указаниях изложены правила сбора и транспортирования биологических материалов в микробиологические лаборатории в целях повышения качества результатов лабораторных исследований и организации противоэпидемических и профилактических мероприятий, а также профилактики внутрибольничных инфекций у медицинского персонала и пациентов.

1.2. Методические указания предназначены для использования органами и организациями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут использоваться органами и организациями здравоохранения.

2. Общие положения

2.1. Получение достоверных данных о выявлении источников заражения необходимо для своевременной и эффективной организации противоэпидемических и профилактических мероприятий, оценки уровня пораженности населения при проведении эпидемиологического надзора.

2.2. Разработанная техника сбора и транспортирования биологических материалов в микробиологические лаборатории позволит снизить уровень преаналитической ошибки и повысить качество работы лабораторий по объективизации результатов.

2.4. Методические указания могут применяться при проведении эпидемиологического надзора за антимикробной резистентностью выделенных и идентифицированных в лаборатории возбудителей инфекции, оптимизации применения антимикробных препаратов и мероприятий в области профилактики, контроля и сдерживания резистентности на локальном, региональном и национальном уровнях.

3. Общие требования к сбору проб биологического материала для микробиологического исследования

3.1. Для предохранения от инфицирования медицинского персонала и пациентов при сборе проб биоматериалов и доставке его в лабораторию необходимо:

не загрязнять наружную поверхность посуды при сборе и доставке проб;

не загрязнять сопроводительные документы (направления);

свести к минимуму непосредственный контакт пробы биоматериала с руками медицинского работника, собирающего и доставляющего его в лабораторию;

использовать стерильные одноразовые или разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке контейнеры (емкости) для сбора, хранения и доставки проб;

транспортировать пробы в переносках или укладках с раздельными гнездами;

соблюдать асептические условия для предотвращения инфицирования пациента в процессе выполнения инвазивных мероприятий;

собирать пробы в стерильную одноразовую или стеклянную посуду (не загрязненную биоматериалом, не испорченную трещинами, отколотыми краями и другими дефектами)

3.2. Пробы биоматериала необходимо собирать следующим образом:

до начала антибактериальной терапии, при отсутствии такой возможности - непосредственно перед повторным введением (приемом) препаратов;

в количестве (вес, объем), необходимом для выполнения анализа, т.к. недостаточное для исследования количество биоматериала приводит к получению ложных результатов;

с минимальным загрязнением материала нормальной микрофлорой, т.к. ее наличие приводит к ошибочной трактовке результатов, полученных, например, при исследовании мокроты, проб из носа, глотки (зева), гениталий и др.

3.3. При сборе пробы следят за тем, чтобы в лаборатории при вскрытии емкости с биоматериалом не образовывался аэрозоль: пробы крови и других жидкостей организма аккуратно без образования пены переносят из шприца в сухую и/или наполненную средой (антикоагулянтом) посуду.

3.4. В направлении на исследование указывают: фамилию, имя, отчество больного; год рождения; отделение, в котором он находится; номер истории болезни (амбулаторной карты); диагноз; материал, посылаемый на исследование, и задачи исследования; дату и время взятия материала (часы); антибактериальные (иммунные) препараты, если проба сдается на фоне антибиотико- и/или иммунотерапии; фамилию, имя, отчество лечащего врача (консультанта), направляющего пробу на исследование. При направлении биоматериалов, полученных при вскрытии, указывают также отделение, в котором умер больной.

3.5. Перед сбором пробы, особенно при применении инвазивных методов, учитывается вероятность риска для пациента и пользы, а также значимость именно данного вида биоматериала для целей объективизации клинического диагноза и оценки проводимых или планируемых лечебных мероприятий.

4. Общие требования к доставке проб биоматериала в микробиологическую лабораторию

4.1. Все собранные пробы отправляют в микробиологическую лабораторию немедленно после получения, за исключением случаев использования емкостей с транспортировочными средами, разрешенными к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке.

Это необходимо для:

сохранения жизнеспособности возбудителей и возможности выделения микроорганизмов, требующих особых условий культивирования (Haemophylus и др.);

предотвращения избыточного роста быстрорастущих и активных микроорганизмов;

поддержания соотношения исходных концентраций изолятов при наличии в пробе микробных ассоциаций;

сокращения времени контакта пробы с некоторыми антисептиками, используемыми местно, которые могут обладать антибактериальной активностью;

объективизации клинического диагноза инфекционно-воспалительного заболевания и оценки результатов терапии.

4.2. Допускается использование альтернативных методов для увеличения сроков доставки биоматериала в лабораторию.

Пробы хранят в холодильнике при температуре 2-8 °С, за исключением нижеперечисленных случаев.

4.2.1. Когда пробу хранят в специализированной транспортировочной емкости (транспортировочная система), разрешенной к применению в установленном порядке, представляющей собой стерильную одноразовую пробирку с агаризованной или жидкой транспортировочной средой и зондом-тампоном, вмонтированным в пробку и стерильно упакованным вместе с пробиркой. В таких емкостях пробы хранят при комнатной температуре (18-20 °С). Транспортировочные среды, специальные плотные с активированным углем и без него, позволяют обеспечить сохранение жизнеспособности микроорганизмов, требующих особых условий культивирования, в течение 48-72 ч.

Для проб на анаэробы и для фекальной флоры используют специальные емкости с транспортировочной средой, пробирки со средами для выделения кампилобактерий и хеликобактера, разрешенные к применению в установленном порядке. Такие среды создают анабиотическую атмосферу для микроорганизмов, что способствует снижению их метаболизма, сдерживанию роста, препятствует их высыханию и накоплению продуктов жизнедеятельности.

Каждую пробу, собранную в жидкую среду, тщательно перемешивают со средой.

4.2.2. Когда кровь культивируют в бульоне, тогда после получения пробу хранят в термостате при температуре 35-37 °С.

Если пробы собирают в специальные емкости для последующего исследования с двухфазной средой, их следует хранить при комнатной температуре (18-20 °С).

4.2.3. Когда при возможном наличии температурозависимых микроорганизмов (Neisseria sp.) пробы оставляют при комнатной температуре (18-20 °С).

4.3. Для транспортирования проб, исследуемых на наличие аэробов и факультативных анаэробов, используют:

одноразовые стерильные сухие пробирки с вмонтированным зондом-тампоном (тубсеры) или емкости с транспортировочной средой, разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке; допускается использование стерильных стеклянных пробирок, укупоренных газопроницаемой пробкой с вмонтированным зондом-тампоном, приготовленных в лаборатории;

одноразовые стерильные емкости с завинчивающейся крышкой (допускаются стеклянные с газопроницаемой пробкой) - для сбора проб мочи, мокроты, фекалий, бронхо-альвеолярного лаважа, биопсийного (кусочки ткани) материала;

стерильные одноразовые с завинчивающейся пробкой или стеклянные пробирки - для сбора стерильных жидкостей, бронхо-альвеолярного лаважа, отделяемого из дренажей или соскобов;

стерильные чашки Петри - для сбора проб волос или для транспортирования соскобов с маркировкой дна чашки;

специальные стерильные носоглоточные и урогенитальные зонды-тампоны с осью из алюминия (диаметр оси - 0,9 мм) и маленьким тампоном из хлопка или вискозы на кончике (диаметр тампона - 2,5 мм), вмонтированным в пробку, укупоривающую стерильную одноразовую стеклянную пробирку - для проб из носоглотки на В. pertusis и из уретры у мужчин.

4.4. Для транспортирования проб, исследуемых на наличие анаэробов, используют емкости со специальными транспортировочными средами и пробирки с тиогликолевой средой; пробирки со средами для выделения кампилобактерий и хеликобактера, разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке. Пробу, собранную в жидкую среду, тщательно с ней перемешивают. Для получения проб рекомендуются следующие приемы:

отделяемое дренажей, используемых для активной аспирации полостей, отсасывают стерильным шприцем с плотным поршнем в объеме 2-4 мл; на заполненный шприц надевают стерильную иглу, закрытую стерильным ватным тампоном, удаляют из шприца избыток воздуха; ватный тампон сбрасывают в дезинфицирующий раствор; конец иглы вкалывают в стерильную резиновую пробку и в таком виде шприц с материалом доставляют в лабораторию;

содержимое очагов инфекции и полостей, получаемое путем их пунктирования, собирают в объеме 2-4 мл с помощью 2-, 5-, 10-миллилитровых шприцев с плотным поршнем; из шприца удаляют избыток воздуха, закрыв иглу стерильным ватным тампоном, который затем сбрасывают в дезинфицирующий раствор; иглу дезинфицируют протиранием тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом; для герметизации конец иглы вкалывают в стерильную резиновую пробку и в таком виде шприц с материалом доставляют в лабораторию.

При сборе большого объема материала (3 мл и более) анаэробные бактерии могут оставаться жизнеспособными в течение 24 ч при комнатной температуре (18-20 °С).

Если отделяемого всего несколько капель, его переносят из шприца в небольшую емкость или в пробирку с транспортировочной средой немедленно после получения (емкости с транспортировочными средами накануне получают в лаборатории).

Кусочки тканей (биопсийный материал) при подозрении на анаэробную инфекцию собирают в стерильные одноразовые емкости с завинчивающейся крышкой (допускается - в стеклянную посуду с притертой крышкой) и доставляют в лабораторию немедленно.

4.5. Для транспортирования проб, исследуемых на наличие вирусов, используют специальные емкости с жидкой средой для сохранения вирусов.

5. Пробы различных видов биоматериала и среды, окружающей больного

Таблица 1

Посуда, используемая для доставки проб в лабораторию

Источник и вид клинического материала	Изделия, используемые для доставки пробы
	Специальные транспортировочные емкости со средой, с нейтрализаторами антибиотиков и реагентами, разрушающими форменные элементы крови, или без них, разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке; двухфазная среда во флаконах
Центральная нервная система
Ликвор	Стерильные одноразовые пробирки с завинчивающейся пробкой; стерильные стеклянные пробирки с целлюлозной или ватно-марлевой пробкой
Материал при абсцессах мозга и биопсийный материал при воспалительных процессах в центральной нервной системе	Шприц с иглой, воткнутой в стерильную резиновую пробку; пробирка с тиогликолевой средой, закрытая стерильной резиновой пробкой; транспортировочные емкости со средой для сохранения анаэробов
Нижние дыхательные пути
Биопсийный материал легких и трахеи; мокрота, естественно откашливаемая и индуцированная; соскоб с бронхов	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой (для сбора мокроты); подготовленная в лаборатории стерильная стеклянная емкость
Аспират трахеи, бронхо-альвеолярный лаваж, смывы с бронхов	Стерильная одноразовая емкость для сбора мокроты с завинчивающейся крышкой; плотно закрывающаяся стерильная стеклянная пробирка
Аспират транстрахеальный и легких	Специальные транспортировочные емкости со средой для анаэробов; шприц с иглой, воткнутой в стерильную резиновую пробку; емкость с тиогликолевой средой; стерильная одноразовая пластиковая емкость с завинчивающейся крышкой; плотно закрывающаяся пробирка
Верхние дыхательные пути
Мазки из носа, зева, носоглотки, наружного уха	Стерильный одноразовый зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер), или транспортировочная емкость с соответствующей средой; транспортировочный сосуд для вирусов; стерильная стеклянная посуда, смонтированная в лаборатории
Назальный смыв, назофагальный аспират	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой; транспортировочный сосуд для вирусов
Жидкость, получаемая при тимпаноцентезе, аспират синуса, получаемые при аспирации иглой	Шприц с иглой, обеззараженной после проведения манипуляции с помощью тампона, смоченного 70%-м этиловым спиртом, и воткнутой в стерильную резиновую пробку; можно перенести материал из шприца в стерильную одноразовую или стеклянную пробирки или специальный сосуд со средой для транспортирования анаэробов
Ткань, получаемая во время операции носа, глотки, уха	Стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой; пробирка с тиогликолевой или другой транспортировочной средой, плотно закрытая стерильной резиновой пробкой; плотно закрытая стерильная одноразовая пластиковая или стеклянная пробирка
Соскобы с конъюнктивы уголка глаза	Мазки на стерильных обезжиренных предметных стеклах; материал, который отбирают в специальный транспортировочный контейнер со средой или засевают в питательную среду
Интраокулярная жидкость	Мазки на стерильных обезжиренных предметных стеклах; материал, который отбирают в специальный транспортировочный контейнер со средой для анаэробов или шприц с предварительно обеззараженной 70%-м этиловым спиртом иглой, воткнутой в стерильную резиновую пробку
Отделяемое, взятое стерильной стеклянной палочкой или стерильным ватным зондом-тампоном со слизистой оболочки нижней переходной складки, с края век, при язве - с роговицы (после обезболивания), при уголковом конъюнктивите - с уголков век	Стерильная одноразовая или стеклянная пробирка с сахарным бульоном, в которую вмонтирован зонд-тампон, или стерильная стеклянная палочка, используемые для взятия пробы; специальный транспортировочный контейнер со средой для вирусов
Секрет из слезного мешка	Одноразовый стерильный зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер), или в стеклянную пробирку
Мочеполовая система
Средняя порция свободно истекающей мочи; из канала подвздошной кишки, использованного для создания искусственного мочевого пузыря; из катетера у реанимационных больных. Смыв из мочевого пузыря. Проба, полученная при билатеральной уретральной катетеризации	Стерильная одноразовая емкость для сбора мочи с завинчивающейся крышкой или стерильная одноразовая пробирка с крышкой; или специальная одноразовая пробирка для сбора мочи. При использовании стерильной стеклянной пробирки с целлюлозной или ватно-марлевой пробкой следят за тем, чтобы не замочить пробку материалом (объем пробы 10-20 мл)
Проба, полученная при проведении надлобковой аспирации	Стерильный шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; стерильный шприц с иглой, предварительно обеззараженной 70%-м этиловым спиртом и воткнутой в резиновую пробку
Материал из женских половых органов
Жидкости: амниотическая, фаллопиевых труб, бартолиновая	Специальная транспортировочная емкость со средой для анаэробов; шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; шприц с иглой, обработанной 70%-м спиртом и воткнутой в стерильную резиновую пробку (объем пробы 1-2 мл)
Пробы из цервикального канала, уретры, влагалища	Одноразовый стерильный зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер) или емкость транспортировочная со специальной средой; зонд-тампон, вмонтированный в целлюлозную или ватно-марлевую пробку стерильной стеклянной пробирки. Предметное стекло с приготовленным мазком для исследования бактериальных инфекций, передаваемых половым путем, и вирусов. Пробирка с транспортировочной средой с активированным углем для сохранения гонококков в течение 48 ч и более
Пробы материала из эндометрия	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой или пробирка, или емкость транспортировочная со средой для анаэробов; стерильная стеклянная посуда
Материал наружных половых органов	Стерильный шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; предметное стекло с мазком, закрытым покровным стеклом для определения Т. pallidum; зонд-тампон, вмонтированный в стерильную одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирку; специальная транспортировочная пробирка со средой с активированным углем для сохранения гонококков и транспортировочные емкости для вирусов и хламидий; мазки на предметных стеклах для обнаружения других возбудителей инфекций, передаваемых половым путем
Материал из мужских половых органов
Мазки из уретры	Зонд-тампон на алюминиевой оси (уретральный зонд-тампон), вмонтированный в стерильные одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирки; специальная транспортировочная пробирка со средой с активированным углем для сохранения гонококков и транспортировочные сосуды для вирусов и хламидий; мазки на предметных стеклах для обнаружения других возбудителей инфекций, передаваемых половым путем
Эякулят, сперма	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой; стерильные пробирка или тубсер, одноразовые или стеклянные
Материал придатков яичка при эпидидимите	Специальный транспортировочный контейнер со средой для анаэробов или емкость с тиогликолевой средой; стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой или стерильная стеклянная пробирка с целлюлозной или ватно-марлевой пробкой
Поражение пениса	Шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; предметное стекло с мазком на Т. pallidum, покрытое покровным стеклом; зонд-тампон, вмонтированный в стерильную одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирку; транспортировочные контейнеры для вирусов и хламидий; мазки для обнаружения других возбудителей инфекций, передаваемых половым путем
Материал при подозрении на наличие гонореи
Мазки из ануса, цервикального канала, уретры, влагалища	Зонд-тампон, вмонтированный в стерильную одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирку; специальная транспортировочная пробирка со средой с активированным углем для сохранения гонококков в течение 48 ч и более
Желудочно-кишечный тракт
Полость рта	Зонд-тампон, вмонтированный в стерильную одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирку; стерильная одноразовая или стеклянная емкость для сбора смыва из ротовой полости
Желудочный лаваж или промывная жидкость; дуоденальный аспират; проба, получаемая при ректороманоскопии; ректальный биопсийный материал	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой; специальный стерильный контейнер для сбора мокроты; стерильная стеклянная емкость; аспират - в стерильном шприце с иглой, предварительно обеззараженной и воткнутой в стерильную резиновую пробку
Ректальный мазок	Одноразовый стерильный зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер); или стерильная пробирка со специальной транспортировочной средой; зонд-тампон из нержавеющего материала, вмонтированный в целлюлозную или ватно-марлевую пробку стерильной стеклянной пробирки
Фекалии на наличие кишечных инфекций ("дизгруппа"), хеликобактера, кампилобактера	Стерильная пробирка с тампоном в физиологическом растворе с глицерином; контейнер транспортировочный со средой для анаэробов в фекальных образцах, со специальными средами с активированным углем и без него для выделения Campylobacter sp. и Helicobacter sp.; зонд-тампон в сухой стерильной одноразовой пробирке (тубсер); стерильная стеклянная пробирка, смонтированная с зондом-тампоном на металлической проволоке из титана, стали, алюминия. Не допускается использование тампона с деревянной осью
Фекалии на наличие дисбактериоза по родовому и видовому составу микробов ("на флору")	Специальный транспортировочный контейнер со средой для анаэробов в фекальных образцах, со специальными средами с активированным углем и без него для выделения Campylobacter sp. и Helicobacter sp., разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке; зонд-тампон в пробирке с физиологическим раствором с глицерином в стерильной одноразовой или стеклянной пробирке; специальный одноразовый стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой; стеклянная, смонтированная в лаборатории емкость
Фекалии на наличие дисбактериоза с количественным учетом выделенных иидентифицированных микробов ("на дисбактериоз")	Специальные стерильные одноразовые контейнеры с завинчивающейся крышкой и лопаточкой для сбора материала и отбора пробы для посева, имеющие стандартный вес; смонтированная в лаборатории специальная стерильная стеклянная емкость
Кожа и подкожные ткани
Язвы, узелки (узелковые утолщения), неглубокие, поверхностные раны (гнойные; ожоги); глубокие раны или абсцессы, кости	Специальные стерильные одноразовые контейнеры с завинчивающейся крышкой; стерильные пробирки с пробками одноразовые или стеклянные объемом 5 мл; емкости со специальными средами для анаэробов
Экссудат подкожной и мягких тканей; аспират мягких тканей	Стерильный шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; шприц с иглой, предварительно обеззараженной 70%-м этиловым спиртом и воткнутой в резиновую пробку
Стерильные жидкости организма, за исключением крови, ликвора, мочи (см. выше)
Жидкости
Плевральная, перитонеальная, асцитическая, суставная, синовиальная	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой; закрытый шприц без иглы или с иглой, предварительно обеззараженной 70%-м этиловым спиртом и воткнутой в стерильную резиновую пробку
Биоматериал для ПЦР-диагностики
Кровь; другие жидкости организма	Стерильные одноразовые пробирки с пробкой объемом 1,5 мл с антикоагулянтом. Пробирку переворачивают 3-5 раз для смешивания пробы с антикоагулянтом. Доставка в лабораторию - в штативе из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Биопсийный материал; соскобы; мокрота и другие виды биоматериала	Стерильные сухие одноразовые пробирки типа "Эппендорф" и другие аналогичные. Доставка в лабораторию - в специальном штативе из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Пробы среды, окружающей больного
Воздух	Стерильные чашки Петри одноразовые (=90 мм) или стеклянные (=100 мм) с плотными питательными средами. Доставка в лабораторию в специальных контейнерах-переносках
Смывы с объектов среды, окружающей больного
Пробы для определения стерильности
Кровь и компоненты крови из отделения, занимающегося их заготовкой	Емкости с заготовленным материалом доставляют в лабораторию в специальных контейнерах-переносках
Смывы с медицинского инструментария, шлангов аппаратуры, используемой в реанимационных и анестезиологических отделениях, а также в операционных; рук медицинского персонала; белья	Стерильные зонды-тампоны, вмонтированные в прозрачные пробирки с прозрачной бесцветной жидкой средой. Пробы доставляют в лабораторию в штативах из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Хирургический материал: тампоны, салфетки, турунды, ватные тампоны на деревянной оси	Стерильные прозрачные пробирки с пробками, с прозрачной бесцветной жидкой средой с 3-5 стерильными стеклянными бусинками. Пробы доставляют в лабораторию в штативах из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Шовный материал: кетгут, хранящийся в операционной в спиртовом растворе йода	Стерильная пробирка (флакон с пробкой) с раствором нейтрализатора (гипосульфит натрия)
Шелк, капрон, мономерные синтетические нити, хранящиеся в операционной в спиртовом растворе	Стерильная пробирка с пробкой со стерильной дистиллированной водой в качестве смывной жидкости. Пробы шовного материала доставляют в лабораторию в штативах, подлежащих стерилизации в автоклаве
Смывы с операционного поля больного	До обработки поля: в прозрачные пробирки, наполненные прозрачной жидкой питательной средой. После обработки поля: стерильная пробирка (флакон с пробкой) с раствором нейтрализатора (гипосульфит натрия). Доставку материала в лабораторию осуществляют в штативах, подлежащих стерилизации в автоклаве
Пробы для определения иммунологических факторов системы антиинфекционной защиты (система антиинфекционной резистентности организма - САИР)
Кровь и другие жидкости организма для определения гуморальных факторов защиты	Одноразовые шприцы-пробирки (вакутайнеры); стерильные одноразовые пробирки с завинчивающейся пробкой; стерильные стеклянные пробирки со стерильными резиновыми, целлюлозными или ватно-марлевыми пробками. Пробы доставляют в лабораторию в специальном штативе из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве. При использовании стеклянных пробирок с ватно-марлевыми пробками - не замочить их при транспортировании
Кровь и другие жидкости организма для определения клеточных факторов защиты	Стерильные одноразовые пробирки с завинчивающейся пробкой; стерильные стеклянные пробирки, плотно закрытые стерильной резиновой пробкой. Пробирки одноразовые с антикоагулянтом, подлежащие центрифугированию. Доставку в лабораторию осуществляют в специальном штативе из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Мазки для определения бактериальных и вирусных антигенов (например, при подозрении на наличие инфекций, передаваемых половым путем)	Стерильное обезжиренное предметное стекло; для Т. pallidum - предметное стекло должно быть покрыто покровным стеклом. Доставку в лабораторию осуществляют в одноразовом контейнере или стерильных одноразовых или стеклянных чашках Петри в специальных контейнерах

Примечание. Пробы гноя, жидкости и тканей следует доставлять в лабораторию в специальных стерильных одноразовых контейнерах с завинчивающимися крышками. Зонды-тампоны - сухими в стерильных одноразовых пробирках (тубсерах) или в емкостях с транспортировочной средой, если материал нельзя доставить в лабораторию немедленно после взятия пробы. Для этих целей можно использовать транспортировочные среды, в т.ч. в одноразовых пробирках, упакованных вместе со стерильным зондом-тампоном, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке. Зонды-тампоны выпускают (готовят) с использованием ряда материалов: для самого тампона (ватно-марлевый, хлопковый, вискозный, дакроновый), для оси зонда-тампона (дерево, пластик, нержавеющий металл - титан, сталь, алюминий) и плотными агаризованными средами: с углем и без него для анаэробов.


Многие клинически значимые анаэробы, например, Clostridium perfringens, Bacteroides fragilis достаточно толерантны к наличию кислорода и хорошо сохраняются в большом количестве гноя, пробах жидкостей и тканях организма, а также на зонде-тампоне в специальной транспортировочной или тиогликолевой средах.

Более чувствительные к кислороду (например, фузобактерии) также хорошо сохраняются в пробе биологического материала, и если материал посеять в течение 2-3 ч от момента его сбора, то не требуется особого внимания к способу доставки. Анаэробы, требующие особых условий культивирования, не сохраняют жизнеспособность на зонде-тампоне в транспортировочной емкости со средой, не предназначенной для доставки анаэробов, за исключением емкостей со специальными транспортировочными средами или тиогликолевой.

Вместе с тем, эти микроорганизмы растут на 5-7 суток дольше времени, в течение которого большинство практических лабораторий инкубирует чашки, засеянные материалом для выделения и идентификации аэробов и факультативных анаэробов. По этой причине в обычных практических лабораториях представляется нецелесообразным рутинное исследование на наличие анаэробов с использованием специальных транспортировочных анаэробных емкостей со средами, и можно ограничиться пробирками с тиогликолевой средой.

Для сбора и транспортирования проб используют среды, емкости, инструменты и материалы, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке.

6. Правила и техника получения проб различных видов биологического материала для микробиологического исследования

Получение у пациента любой пробы, требующей использования инвазивных методов, рекомендуется производить врачом (исключение - проба крови, которую может собирать процедурная медицинская сестра).

При необходимости сбора материала при помощи зонда-тампона на открытой операционной поверхности или в случае иного инвазивного вмешательства допустимо использование готовых зондов-тампонов с международным уровнем безопасности не ниже Class IIA, разрешенных к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке.

6.1. Пробы крови

Пробы для определения наличия в крови биологических агентов (бактериемия, виремия и др.) получают венопункцией периферических вен (чаще вены локтевого сгиба), артерий или из пятки у новорожденных.

Сбор пробы из постоянного внутривенного или внутриартериального катетеров допускается только в случаях подозрения на наличие катетер-ассоциированной инфекции или отсутствия возможности ее получения венопункцией.

6.1.1. При остром сепсисе, менингите, остеомиелите, артрите, острых нелеченных бактериальных пневмониях и пиелонефрите собирают 2 пробы из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда перед началом антибактериальной терапии.

6.1.2. При подозрениях на наличие эндокардита и вялотекущего сепсиса с маленькой (10-30 КОЕ/мл) концентрацией возбудителя в циркуляции:

при наличии острого процесса собирают 2 пробы из двух участков сосудов (различных сосудов) в течение первых 1-2 ч подъема температуры тела (не на пике температуры!) и до начала терапии;

при подостром или вялотекущем течении собирают в первый день 3 пробы с интервалом 15 мин и более. Если все пробы отрицательны, на вторые сутки после посева собирают еще 3;

у пациентов с эндокардитами, получающими антибиотики, собирают по 2 отдельные пробы в каждый из трех дней с положительной клинической динамикой терапии;

для подтверждения клинического диагноза "инфекционный эндокардит" при невозможности получения у пациента необходимого количества проб крови для микробиологического анализа или при отрицательных результатах посевов пробы крови посылают на исследование иммунологических факторов системы защиты организма (системы антиинфекционной резистентности - САИР); доставку в лабораторию осуществляют в стерильных стеклянных или одноразовых пробирках с крышкой (пробкой), полученных накануне в лаборатории;

если больной страдает врожденным пороком сердца (ВПС), следует помнить, что ВПС - продром инфекционного эндокардита, и в алгоритм обследования такого пациента включают определение иммунологических факторов САИР.

6.1.3. У больных, в комплекс терапии которых включены антибиотики, собирают 6 проб в течение 48 ч; пробы необходимо собирать непосредственно перед введением (приемом) следующей дозы препарата.

6.1.4. При наличии у больного лихорадки неясного генеза первоначально собирают 2 пробы из разных кровеносных сосудов (двух участков сосуда), затем через 24-36 ч еще 2 пробы на фоне повышения температуры тела (не на пике температуры!).

6.1.5. Техника получения пробы крови. Сбор проб крови для посева производят 2 человека у постели больного или в процедурной.

Для получения пробы необходимо выполнить следующее:

участок кожи над выбранным для пункции сосудом продезинфицировать: обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1-2%-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с;

подождать, пока высохнет обработанный участок. Не допускается пальпировать сосуд после обработки кожи перед введением иглы;

при работе с флаконами с двойной средой: стерильным шприцем собрать у взрослых 10 мл крови, у детей - 5 мл; над пламенем спиртовки открыть флакон; внести кровь во флакон из шприца, предварительно сняв иглу; обжечь горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки, закрыть флакон пробкой; осторожно, чтобы не замочить пробку флакона, перемешать его содержимое круговыми движениями.

При использовании готовых флаконов со средой и реагентами, нейтрализующими антибиотики и разрушающими форменные элементы крови, или без них, разрешенными к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке, у взрослых получают 10-30 мл крови, у детей - 0,5-3,0 мл.

При этом:

параллельно с дезинфекцией участка кожи для пунктирования обрабатывают пробки флаконов 70%-м этиловым спиртом (раствор йода не допускается использовать для обработки пробок при работе с бутылочками, например, Bactec, Vital и другими аналогичными, разрешенными к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке);

кровь, получаемую от взрослых, в равных объемах, проколов при этом пробку емкости, вносят в "аэробную" и "анаэробную" емкости; кровь, полученную от детей, - в специальную "детскую" бутылочку, проколов при этом пробку емкости.

6.1.6. После венопункции и посева крови в емкости со средой для предотвращения возможного раздражения (ожога) с участка кожи пациента стирают остатки йода с помощью тампона, смоченного 70%-м этиловым спиртом.

6.2. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах центральной нервной системы (ЦНС)

6.2.1. Ликвор. В микробиологическую лабораторию на исследование отправляют 4,0-5,5 мл ликвора, полученного при люмбальной пункции из субарахноидального пространства между позвонками L3-L4, L4-L5 или L5-S1, а также при пунктировании боковых желудочков мозга.

Сбор проб проводят медленным заполнением трех пробирок тремя порциями материала для исследования в лабораториях. Используют стерильные пробирки с плотно закрывающимися крышками (одноразовые с пробкой или стеклянные со стерильной резиновой пробкой).

Из трех пробирок с материалом, полученным при люмбальной пункции, всегда отправляют пробирку с самым мутным содержимым, как правило, это вторая пробирка в процессе сбора пробы.

При получении материала пункцией боковых желудочков мозга, свежевзятый ликвор из шприца, предварительно сняв иглу, вносят в стерильную пробирку над пламенем спиртовки, обжигают горлышко пробирки и пробку в пламени спиртовки (при работе со стеклянной пробиркой, заделанной ватно-марлевой или резиновой пробками), закрывают пробирку пробкой.

Во всех случаях, подозрительных на менингит, помимо спинно-мозговой жидкости собирают материал из предполагаемых очагов инфекции: мазки из носоглотки, среднего уха, пробы крови, и вместе с ликвором отправляют в лабораторию. Хорошим способом длительного (до 48 ч) сохранения менингококка является взятие материала мазком зондом-тампоном и помещение его в пробирку с транспортировочной средой с активированным углем или без него.

Ликвор для микробиологического исследования немедленно отправляют в лабораторию на грелке для сохранения температуры 35-37 °С. При отсутствии такой возможности ликвор собирают в емкость с транспортировочной средой и оставляют в холодильнике (при температуре 4-8 °С) до утра, а затем доставляют в лабораторию.

При необходимости проведения вирусологических исследований пробы ликвора помещают в холодильник при температуре 2-8 °С или замораживают, или сохраняют их при комнатной температуре с использованием емкостей со специальной жидкой средой.

6.2.2. Материал из абсцессов мозга. Учитывая, что в 90% случаев в пробе растут анаэробы, аспирируют материал из очага и отправляют в лабораторию в емкости с анаэробной средой, разрешенной к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке, или в шприце, которым собирали пробу, предварительно сняв иглу и закрыв шприц стерильной резиновой пробкой.

Пробу доставляют немедленно после получения.

6.2.3. Биопсийный материал. Получают пробы во время операции, помещают в емкость с анаэробной средой или в стерильную пробирку с тиогликолевой средой, закрытую стерильной резиновой пробкой.

Материал отправляют в лабораторию немедленно.

6.3. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах глаз

Большинство проб, получаемых из глаза, собирает врач-офтальмолог. Эти пробы следует сеять на питательные среды у постели больного или в процедурном кабинете, или в кабинете врача во время приема, и засеянный материал передавать в лабораторию для культивирования, выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности возбудителей. Пробы, взятые при использовании инвазивных и других агрессивных методов, собирают параллельно с мазком с конъюнктивы, который в таких случаях служит контролем.

Накануне, за 6-8 ч (ночь), отменяют все медикаменты и процедуры.

При наличии специфических клинических проявлений инфекционно-воспалительного процесса или подозрений, имеющихся у врача, обязательно до анестезии готовят мазки для определения хламидий и вирусов, и отправляют препараты в лабораторию. Для сохранения хламидий и вирусов собирают материал в емкости с транспортировочными средами.

Отделяемое собирают стерильной стеклянной палочкой или стерильным зондом-тампоном: двумя-тремя движениями проводят по слизистой оболочке нижней переходной складки, с края век; при язве - с роговицы (после обезболивания), при "уголковом конъюнктивите" - с уголков век.

Секрет из слезного мешка собирают стерильным зондом-тампоном после осторожного массажа.

Материал, взятый палочкой и/или зондом-тампоном, помещают в емкость с транспортировочной средой или в стерильную стеклянную пробирку с жидкой средой и доставляют в лабораторию, внимательно следя за тем, чтобы не замочить целлюлозную или ватно-марлевую пробку пробирки.

При использовании зондов-тампонов предпочтительнее пользоваться одноразовыми емкостями с транспортировочной средой или стерильными стеклянными пробирками с ватно-марлевыми пробками, наполненными стерильной средой.

Наиболее корректную информацию о возбудителе воспалительного процесса можно получить при микробиологическом анализе соскобов.

6.3.1. Конъюнктивит и блефароконъюнктивит. Накануне, за 6-8 ч (ночь), у больных в стационаре отменяют все медикаменты и процедуры.

Пробы с конъюнктивы собирают с помощью стерильного, предварительно увлажненного вискозного или из алгината кальция зонд-тампона, находящегося в одноразовом стерильном тубсере или стеклянной пробирке. Пробы из каждого глаза собирают отдельными тампонами двумя-тремя круговыми движениями по слизистой.

Тубсеры с мазками из каждого глаза маркируют соответственно "правый" и "левый" и немедленно отправляют в лабораторию.

Перед получением соскоба вводят 1-2 капли анестетика, например, пропаракаина гидрохлорида или другого, имеющегося и разрешенного к применению для этих целей в установленном порядке.

Двумя-тремя короткими резкими движениями в одном направлении с помощью специального стерильного шпателя собирают соскобы с конъюнктивы. При проведении манипуляции глаз должен быть открыт.

Внимательно следят за тем, чтобы при сборе пробы не касаться ресниц.

Готовят, по меньшей мере, по 2 мазка из каждого глаза, нанося материал на чистое обезжиренное предметное стекло круговыми движениями на площадь диаметром 1 см.

Фиксируют мазки в течение 5 мин в 95%-м метиловом спирте, находящимся в специальной, плотно закрывающейся емкости.

Немедленно передают в лабораторию пробирки с зондами-тампонами и стекла с мазками.

6.3.2. Бактериальный кератит. Накануне, за 6-8 ч (ночь), у больных в стационаре отменяют все медикаменты и процедуры.

Получают 2 пробы с конъюнктивы, как описано в п.6.3.1, т.к. результаты их посева могут быть полезны для определения источника контаминации роговицы (одну пробу используют при подозрении на наличие грибковой инфекции).

При подозрении на наличие вирусной инфекции конъюнктивальный экссудат и материал, полученный соскобом, помещают в специальную транспортировочную среду для вирусов.

Проводят обезболивание, как указано в п.6.3.1.

Собирают 3-5 соскобов методом, описанным в п.6.3.1.

Помещают собранный материал в маленькую (5 мл) стерильную одноразовую пробирку с завинчивающейся пробкой или стерильную стеклянную с резиновой пробкой, наполненную средой.

Готовят 2-3 мазка на предметном стекле, и после высыхания фиксируют их, как описано в п.6.3.1.

Немедленно передают весь материал в лабораторию.

6.3.3. Бактериальный эндоофтальмит. Пробу жидкости стекловидного тела (1-2 мл) собирают путем тонкоигольной аспирации и получают образец при проведении витректомии.

Далее выполняют следующее:

Из шприца, удалив иглу, содержимое помещают в одноразовый стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой или пробирку, плотно закрытую резиновой пробкой;

пробу материала можно оставить в шприце, убрав воздух и удалив иглу, закрывают шприц стерильной резиновой пробкой;

собирают пробу с конъюнктивы, как описано в п.6.3.1;

весь материал немедленно отправляют в лабораторию.

6.3.4. Пресептальный целлюлит. Обрабатывают кожу 70%-м этиловым спиртом и 1-2%-м раствором йода или йодоформом или другим имеющимся дезинфектантом, разрешенным к применению в установленном порядке.

При отсутствии открытой раны для сбора материала прокалывают верхнее или нижнее веко.

При наличии открытой раны собирают пробу гнойного материала шприцем с иглой.

Готовят мазки на предметном стекле, как описано в п.6.3.1.

Переносят собранный материал в транспортировочную емкость со средами для анаэробов или, оставив в шприце, который, удалив из него воздух и сняв иглу, закрывают пробкой.

Собранный материал и мазки немедленно отправляют в лабораторию.

6.3.5. Орбитальный целлюлит. Собирают аспират из зоны по методике, изложенной ранее в п.6.3.2.

Собирают пробу с конъюнктивы и готовят мазки на предметном стекле, как в п.6.3.1.

Для доставки в лабораторию используют материалы, описанные в п.6.3.3.

Собирают у пациента пробы крови по методике, изложенной в п.6.1. Пробы крови, весь собранный материал передают в лабораторию.

6.3.6. Воспаление слезной железы (дакриоаденит).

Собирают гнойное содержимое, используя зонд-тампон, как в п.6.3.1.

Не пользуются методом аспирации иглой, чтобы не нарушить целость слезной железы.

Зонд-тампон и предметные стекла с мазками передают в лабораторию.

6.3.7. Воспаление слезного мешка (дакриоцистит). Получают пробу с конъюнктивы, как в п.6.3.1.

Массируют и надавливают на слезный мешок, чтобы получить пробу экссудата для посева и приготовления мазков или, используя другой метод, собирают экссудат шприцем с иглой.

Помещают собранную пробу экссудата в транспортировочные емкости, как это описано ранее, и доставляют в лабораторию.

6.3.8. Каналикулит. Прижимают внутреннюю часть века, чтобы получить гной.

Далее проводят работу по методикам, изложенным ранее в этом разделе.

При наличии в лечебно-профилактической организации специализированного отделения (клиники) все посевы производят у постели больного на питательные среды, полученные в лаборатории. Засеянный материал вместе с приготовленными мазками передают в лабораторию.

6.4. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах уха

6.4.1. При поражении наружного уха проводят обработку кожи 70%-м спиртом с последующим промыванием стерильным физиологическим раствором. Отделяемое из очага собирают на стерильный одноразовый зонд-тампон тубсера или пробирки с транспортировочной средой, или на тампон, вмонтированный в стерильную стеклянную пробирку, закрытую пробкой, со специальной средой или без нее. Тампон помещают в пробирку и доставляют в лабораторию.

6.4.2. При поражении среднего и внутреннего уха собирают пунктаты и другой материал, полученный во время операции. Пунктаты доставляют в лабораторию в закрытом шприце с предварительно удаленным воздухом. Образцы ткани - в транспортировочной емкости со средой для анаэробов, разрешенной к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке, или в стерильном одноразовом контейнере с завинчивающейся крышкой. Возможно использование стерильной стеклянной пробирки, закрытой стерильной резиновой пробкой.

6.4.3. Тимпаноцентез барабанной перепонки проводят для микробиологической диагностики инфекций среднего уха только в случаях, если больной не отвечает на проводимую ранее терапию или при торпидном течении катарального среднего отита даже при визуальном отсутствии экссудата в выступающей крови (высевы из носоглотки положительны менее чем в 90% случаев).

Для получения пробы очищают наружный канал с помощью тампона, смоченного 70%-м этиловым спиртом, с последующей обработкой стерильным физиологическим раствором.

С помощью шприца собирают жидкость из барабанной полости. В лабораторию пробу доставляют в стерильном одноразовом контейнере с завинчивающейся крышкой или в закрытом шприце с предварительно удаленным воздухом.

Если барабанная перепонка повреждена, материал собирают зондом-тампоном с помощью зеркала. Тампон помещают в стерильную одноразовую пробирку (тубсер) или емкость с транспортировочной средой (допускается использование стерильной стеклянной пробирки со средой или без нее), и в таком виде доставляют в лабораторию.

6.5. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах дыхательных путей

6.5.1. Верхние дыхательные пути. При подозрении на наличие у больного дифтерии, коклюша, хламидиоза, микоплазмоза, легионеллеза, гонореи, до доставки пробы информируют работников лаборатории, чтобы они подготовились к анализу такого вида материала.

6.5.1.1. Пробу со слизистых передних отделов полости носа собирают одним стерильным зондом-тампоном, вмонтированным в стерильную одноразовую пробирку (тубсер) или специально вмонтированным в стерильную стеклянную пробирку:

извлекают тампон из пробирки, вводят в правую ноздрю и вращательными движениями собирают материал с крыльев носа и верхнего угла носового отверстия;

повторяют манипуляцию для левой ноздри;

помещают тампон в пробирку и доставляют в лабораторию.

Пробы, полученные таким способом, полезны для определения носительства золотистого стафилококка у медицинских работников, наличия возбудителей внутрибольничной инфекции, а также для характеристики дисбиотических нарушений слизистых верхних дыхательных путей при комплексном клиникоиммуномикробиологическом обследовании пациентов, проводимом в научно-практических лабораториях.

При наличии в полости носа очагов воспалений или изъязвлений отдельным тампоном собирают материал из очага (очагов).

6.5.1.2. Аспираты из носоглотки собирают для определения носительства стрептококка пиогенного, менингококка, возбудителей дифтерии и коклюша, а также при проведении эпидемиологических исследований антимикробной резистентности S. pneumoniae и Н. influenzae:

отсасывают материал из носоглотки;

переносят материал в стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся пробкой или специальную стерильную пробирку с газопроницаемой целлюлозной или ватно-марлевой пробкой, внимательно следя за тем, чтобы не замочить ее пробой клинического материала.

6.5.1.3. Мазок из носоглотки. Материал собирают для определения носительства менингококка и диагностики коклюша.

Осторожно вращательными движениями по нижнему носовому ходу поочередно в обе ноздри вводят в носоглотку зонд-тампон хлопковый, вискозный или с алгинатом кальция. Одновременно крылья носа прижимают к тампону и носовой перегородке для более плотного его контакта со слизистой оболочкой.

Помещают тампон в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию.

6.5.1.4. Назальный смыв используют для определения наличия не только бактериальной, но и преимущественно вирусной инфекции.

Предупреждают пациента, чтобы он не глотал при проведении процедуры.

Помещают голову пациента в положение вверх-назад под углом приблизительно 70°, вводят в каждую ноздрю по 5 мл стерильного физиологического раствора, пациент должен находиться в таком положении 3-5 с.

Для сбора материала опускают голову пациента вперед, чтобы жидкость вылилась из ноздрей в стерильный одноразовый контейнер или аспирируют жидкость введением резинового дренажа в каждую ноздрю.

Помещают равный объем смыва в емкость с транспортировочной средой для вирусов или доставляют эту порцию в стерильном одноразовом контейнере.

6.5.1.5. Пунктат пазухи. Используя методику аспирации шприцем, специально подготовленный опытный врач или отоляринголог получает материал из верхнечелюстной фронтальной или других пазух. Содержимое шприца помещают в емкость с транспортировочной средой для анаэробов или в стерильную пробирку с тиогликолевой средой. Можно оставить материал в шприце и, закрыв его стерильной резиновой пробкой, доставить в лабораторию.

6.5.1.6. Получение пробы со слизистой глотки (зева).

Не допускается собирать материал из глотки (зева) при воспаленном надгортаннике, так как проведение процедуры может привести к серьезной респираторной обструкции.

При взятии пробы со слизистой зева (глотки) не касаются тампоном слизистых щек, языка, десен, губ, а также не собирают слюну, так как этот материал характеризует слизистые ротовой полости, то есть верхний отдел желудочно-кишечного тракта.

Мазок из зева (глотки) собирают натощак или через 3-4 ч после приема пищи. Перед взятием пробы больной должен прополоскать рот теплой кипяченой водой.

Для получения пробы используют стерильный шпатель или тампон: извлекают вискозный тампон из стерильной одноразовой пробирки (тубсера) или используют приготовленный в лаборатории тампон, вмонтированный в стерильную стеклянную пробирку. Использование зонда-тампона с вискозной головкой предпочтительнее, т.к. вискоза адсорбирует меньше жидкости и больше клеточного материала.

Одной рукой прижимают язык больного стерильным шпателем.

Другой рукой собирают материал, поочередно обрабатывая тампоном правую миндалину, правую небную дугу, левую миндалину, левую небную дугу, язычок, на уровне язычка касаются тампоном задней стенки глотки.

Пробы, полученные таким способом, полезны для определения наличия возбудителя внутрибольничной инфекции, а также для характеристики дисбиотических нарушений слизистых верхних дыхательных путей при комплексном клинико-иммуномикробиологическом обследовании пациентов, проводимом в научно-практических лабораториях.

При наличии очагов воспалений или изъязвлений на слизистой относятся к сбору пробы особенно внимательно и собирают отдельным тампоном дополнительно материал из очага (очагов).

Помещают тампон в стерильную одноразовую или стеклянную пробирку и доставляют в лабораторию.

6.5.1.7. При подозрении на дифтерию информируют работников лаборатории, указав диагноз в направлении.

В случаях наличия респираторного патологического процесса одновременно собирают материал со слизистых носоглотки и глотки по методикам, представленным ранее.

Если подозревают кожную форму дифтерии, собирают материал с кожи, а также со слизистых зева (глотки) и носоглотки и все пробы доставляют в лабораторию.

6.5.2. Нижние дыхательные пути. Микробиологическая диагностика воспалительных процессов в нижних дыхательных путях представляет серьезные трудности, т.к. в процессе сбора проба может быть контаминирована микроорганизмами, обсеменяющими верхние дыхательные пути. Эта экологическая ниша достаточно обильно обсеменена условно-патогенными микробами, особенно при наличии дисбактериоза (качественного - видовой состав и/или количественного - концентрация присутствующих видов в КОЕ/мл у ослабленного и/или иммунокомпрометированного контингента обследуемых).

По этой причине пробы материала из нижних дыхательных путей собирают особенно тщательно для получения корректной информации об этиологическом агенте (агентах). При использовании инвазивных методов для сбора пробы (если это происходит не во время операции) применяемые инструменты проходят через верхние дыхательные пути, и появляется реальная возможность обсеменения более глубоких локусов микроорганизмами - обитателями верхних дыхательных путей.

6.5.2.1. Мокрота.

Свободно отделяемая (отхаркиваемая) мокрота - предпочтителен утренний сбор.

Перед сбором пробы пациент, если это возможно, должен почистить зубы и сполоснуть рот и горло теплой кипяченой водой, если пациент не в состоянии сделать это сам, то туалет его ротовой полости осуществляют медицинские работники.

Предупреждают больного, чтобы он не собирал в контейнер слюну или носоглоточное отделяемое.

Пробу мокроты, полученную в результате глубокого кашля, собирают в специальный стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой или в специальным образом подготовленную стерильную стеклянную банку.

Пробу мокроты передают в лабораторию.

Индуцированная мокрота (рекомендуется преимущественно при подозрении на Mycobacterium tuberculosis и Pneumocystis yiroveci) - предпочтителен утренний сбор.

Перед сбором пробы пациент, если это возможно, должен почистить зубы и сполоснуть рот и горло теплой кипяченой водой; если пациент не в состоянии сделать это сам, то туалет его ротовой полости осуществляет медицинский персонал.

До проведения процедуры смачивают чистую зубную щетку теплой кипяченой водой и проводят ею по слизистой обеих щек, языку и деснам.

Активно споласкивают рот пациента теплой кипяченой водой.

Используя ингалятор, дают больному проглотить 20-30 мл 3-10%-го стерильного физиологического раствора.

Собирают индуцированную мокроту в специальный стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой или в стерильную стеклянную банку, подготовленную соответствующим образом.

Передают пробу в лабораторию.

Одновременно с пробой мокроты в лабораторию следует отправить пробу из глотки (зева), собранную после проведенного туалета полости рта и непосредственно перед сбором мокроты, свободно отделяемой (отхаркиваемой) или индуцированной.

6.5.2.2. Аспираты из трахеостомы и эндотрахеальные. Трахеостома колонизируется микроорганизмами уже через 24 ч после интубации пациента, вследствие чего результаты культурального исследования имеют низкую клиническую значимость. Учитывая изложенное, результаты посевов, полученные у интубированных больных, необходимо постоянно сравнивать с клиническими данными (например, лихорадка или появление инфильтратов на рентгене).

Пробы смыва с бронхов или бронхоальвеолярного лаважа собирают, если это возможно, до получения проб соскобов или биопсийного материала. Правило продиктовано необходимостью избежать избытка крови в получаемой жидкости, т.к. кровь может изменить концентрацию клеточных и неклеточных компонентов пробы и оказать влияние на результат микробиологического анализа.

Пробу-аспират собирают в стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой или в стерильную стеклянную емкость, смонтированную соответствующим образом, или в стерильную одноразовую стеклянную пробирку с пробкой, или доставляют в лабораторию в закрытом шприце с удаленным воздухом.

6.5.2.3. Пробы, полученные с использованием бронхоскопа. Бронхоальвеолярный лаваж (образец выбора), смыв с бронхов (низкая чувствительность при диагностике пневмоний), соскоб с бронхов (более значим, чем смыв), образцы транстрахеальной биопсии получают введением бронхоскопа трансназально или трансорально неинтубированному больному или через эндотрахеальную трубку - у интубированного.

Для получения пробы смыва с бронхов или бронхоальвеолярного лаважа:

вводят шприцем через биопсийный канал бронхоскопа отдельными порциями стерильный небактериостатический (официнальный) физиологический раствор (общий объем от 5-20 до 100 мл);

перед введением следующей порции физиологического раствора осторожно отсасывают введенной частью шприца в стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой или в стерильную одноразовую или стеклянную пробирку с пробкой, или оставляют в закрытом шприце, предварительно удалив из него воздух (как правило, 50-70% введенного физиологического раствора находится в лаваже);

каждую отсасываемую порцию собирают в отдельную посуду;

по окончании процедуры соединяют пробы, полученные из одного и того же участка. Пробы из разных участков (например, правая верхняя доля легкого и правая нижняя доля) следует соединять вместе только после консультации с лечащим врачом;

в направлении указывают общий объем введенного физиологического раствора.

Для получения пробы соскоба с бронхов:

через биопсийный канал бронхоскопа вводят телескопический двойной катетер с обработанным полиэтиленгликолем (или другим соответствующим реактивом) дистальным концом для предотвращения контаминации пробы;

собирают материал в стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой или в транспортировочную емкость со средой для анаэробов или в стерильную пробирку с тиогликолевой средой, плотно закрытую стерильной резиновой пробкой;

доставляют материал в лабораторию.

Для получения трансбронхиального биоптата собирают пробу через биопсийный канал бронхоскопа и, поместив ее в стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой с небольшим количеством (1-2 мл) небактериостатического (официнального) физиологического раствора или в пробирку с тиогликолевой средой, плотно закрытую резиновой пробкой, передают в лаборатори

6.5.2.4. Пробы аспирата легких. Для сбора пробы иглу через грудину вводят в инфильтрат легкого под контролем сканнера компьютерного томографа. Материал аспирируют из очага воспаления. Если имеется большой инфильтрат или их несколько, необходимо получить несколько проб из соответствующих очагов или несколько проб из одного большого очага. В лабораторию материал передают в транспортировочном контейнере со средой для анаэробов или в стеклянной пробирке с тиогликолевой средой, или в завинчивающемся одноразовом контейнере.

6.5.2.5. Пробы биоптатов легких. Если возможно, получают кусочки ткани величиной 1-3 см. Если очаг большой или их несколько, собирают несколько проб. Помещают пробу в стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся пробкой или в транспортировочную емкость со средой для анаэробов, или в емкость (пробирку) с тиогликолевой средой, закрытую стерильной резиновой пробкой.

6.6. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах мочеполовой системы

6.6.1. Пробы мочи.

6.6.1.1. Общие правила сбора проб:

не допускается собирать мочу с постельного белья или из мочеприемника;

для анализа мочи при естественном мочеиспускании используют среднюю утреннюю порцию;

перед сбором пробы необходимо тщательно промыть наружные половые органы и область заднего прохода теплой кипяченой водой; особое внимание при этом следует уделять обработке отверстия мочеиспускательного канала у мужчин (преддверию влагалища - у женщин) для уверенности, что при проведении процедуры проба не будет дополнительно контаминирована микробами;

для проведения обработки не допускается использовать дезинфектанты, т.к. при попадании в пробу они могут ингибировать рост микроорганизмов;

пробу передают в лабораторию не позднее 2 ч с момента сбора;

для сбора и доставки проб в лабораторию используют стерильные одноразовые контейнеры с завинчивающейся крышкой или пробирки (возможно использование стерильных специально смонтированных стеклянных пробирок с газопроницаемой целлюлозной или ватно-марлевой пробкой, но при этом особое внимание уделяют тому, чтобы не замочить пробку);

доставку в лабораторию проб аспиратов, полученных с использованием техники надлобковой пункции мочевого пузыря, осуществляют в транспортировочной емкости со специальной средой для анаэробов или в закрытом шприце без иглы;

пробы при подозрении на наличие вирусной инфекции доставляют в лабораторию в стерильном одноразовом контейнере, помещенном на подтаявший лед (сухой лед использовать не допускается!);

любую процедуру получения пробы с использованием катетера (особенно у женщин) проводят с тщательным соблюдением правил асептики для предотвращения дополнительной контаминации пациента в процессе введения катетера;

для микробиологического исследования не допускается использовать пробу из суточной м

6.6.1.2. Сбор пробы мочи у женщин при естественном мочеиспускании.

Используют среднюю порцию, т.к. первый пассаж мочи должен удалить комменсалов, возможно находящихся в уретре. Проба, собранная при следующих пассажах, должна быть свободна от загрязнения. Достоверность положительных результатов такого материала составляет 80% при сборе одной пробы, 90% - при двух последовательных и 100% - при трех, если все пробы дают одинаковые результаты.

Медицинский работник, собирающий пробу, должен вымыть руки с мылом, сполоснуть водой, высушить. Если пробу собирает сам пациент, ему подробно объясняют, как это делают, с учетом изложенной выше подготовки, и предупреждают о том, что может произойти, если он нарушит правила:

следует тщательно промыть отверстие мочеиспускательного канала и область преддверия влагалища, а также промежность и область заднего прохода мыльной водой или жидким мылом, сполоснуть теплой кипяченой водой, высушить стерильной марлевой салфеткой;

отверстие влагалища необходимо закрыть стерильным ватным тампоном;

наружные половые губы держите на расстоянии друг от друга в процессе мочеиспускания;

спустите небольшое количество мочи в специальную посуду для утилизации, не прекращая при этом мочеиспускания;

соберите среднюю порцию мочи (10-20 мл) в специальный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой или специально смонтированную в лаборатории стерильную стеклянную емкость.

6.6.1.3. Сбор пробы мочи у мужчин при естественном мочеиспускании.

У мужчин для микробиологического исследования требуется одна порция мочи, т.к. вероятность контаминации у них существенно меньше, чем у женщин.

Собирающий пробу должен вымыть руки с мылом, сполоснуть водой, высушить. Если пробы собирает сам пациент, ему необходимо детально объяснить, как это делают, с учетом изложенной ниже подготовки, и предупредить о том, что может произойти при нарушении правил:
[email protected] , мы разберемся.

Отбор клинического материала осуществляет медицинский персонал с соблюдением правил противоэпидемического режима, только стерильными одноразовыми инструментариями (шприцы, соответствующие зонды, цитощеточки и пр.), в одноразовых перчатках.

Максимально полно собрать материал из выбранного локуса, используя подходящие для этого аппликаторы – зонды, цитощетки (обеспечить адекватность клинического образца).

Сохранить полученный материал (ДНК/РНК микроорганизмов), используя надежные транспортные среды и консерванты, предоставляемые ПЦР-лабораторией. Среда для транспортировки и хранения клинического материала обеспечивает стабильность РНК и ДНК при комнатной температуре до 28 дней.

Поместить взятый материал в вакуэты с ЭДТА (кровь), в одноразовые химически чистые пробирки «Эппендорф» (мазки, ликвор, биоптат и др.). Основным условием при сборе материала является предотвращение попадания в пробу ДНК-аз и рибонуклеаз, т.к. рибонуклеазы и ДНК-азы – ферменты деградации РНК и ДНК. Они чрезвычайно стабильны в окружающей среде, выдерживают длительное кипячение. Основной источник нуклеаз – кожные покровы, частицы пыли. Пластиковые пробирки и наконечники должны иметь маркировку «DNase, RNase- free» (свободные от нуклеаз).

Сразу после забора плотно закрывать пробирки, флаконы с клиническим материалом, не касаясь их внутренней поверхности и внутренней поверхности крышек.

При работе с клиническим материалом, открывая пробирки, флаконы, не производить резких движений и не допускать разбрызгивания и расплескивания, что может привести к контаминации проб и рабочих поверхностей.

Для исключения взаимной контаминации образцы хранить и транспортировать в отдельном полиэтиленовом пакете или штативах. При необходимости переноса образца использовать автоматические микропипетки со сменными одноразовыми наконечниками с аэрозольными барьерами.

До транспортировки в ПЦР-лабораторию отобранный биоматериал хранить при температуре 2–4 °С не более 48 часов. Необходимо минимизировать время от забора образца до постановки ПЦР-анализа. Транспортировка образцов осуществляется в сумках-холодильниках, термоконтейнерах, термосах с термопакетами, льдом или сухим льдом.

Кровь, плазма, сыворотка

Забор крови рекомендуется проводить с использованием вакуумных систем. Внедрение таких систем позволяет стандартизировать манипуляции с кровью, положительно сказывается на всех этапах лабораторного исследования и в целом переводит работу лаборатории на иной, более высокий уровень качества. Их использование гарантирует защиту персонала от инфицирования, сокращается время, затрачиваемое на процедуру забора крови, значительно реже сопровождается гемолизом, позволяет сохранить стерильность проб крови и герметично транспортировать.

Венепункцию рекомендуется выполнять натощак из локтевой вены в специальную вакуумную пробирку с антикоагулянтом, после чего пробирка переворачивается для перемешивания несколько раз. Пробирки с кровью хранят в холодильнике при +4 °С – +8 °С. Максимальный срок хранения крови – 1 сутки (не замораживать!). В случае необходимости длительного хранения необходимо отобрать 1 мл сыворотки или плазмы крови и хранить ее при температуре -16 о -20 о С не более 2 недель.

Характеристика вакуумных систем, используемых для ПЦР-диагностики:

Вакуэты с ЭДТА (6 %) – используются для проведения качественных и количественных исследований. ЭДТА-антикоагулянт хорошо фиксирует нуклеиновые кислоты клетки.

Вакуэты с цитратом натрия (3,8 %) – используются для проведения качественных и количественных исследований. Не подходят для длительной транспортировки, т.к. цитрат является хорошей питательной средой для посторонней микрофлоры.

Вакуэты без антикоагулянтов (сыворотка крови) – используются для проведения качественных исследований. Использования сыворотки крови для количественных исследований нежелательно, т.к. часть инфекционного агента оседает в сгустке крови, при этом снижается возможность определения количественного содержания его в крови.

Вакуэты с гепарином - категорически не подходят для ПЦР - реакции. Гепарин является полианионом, как и ДНК, поэтому в ПЦР-реакции конкурирует с ДНК.